Beckman Coulter MicroScan B1016-138 Manuel D'utilisation page 48

PROCEDURA
Preparazione dei pannelli
1. Estrarre dalla confezione i pannelli da utilizzare. Non utilizzare se l'integrità dell'imballaggio è stata compromessa
(dissigillato, forato o strappato).
2. Aprire l'involucro e rimuovere il pannello. Se conservato in frigorifero, estrarre subito il pannello dall'involucro.
3. Non utilizzare i pannelli in presenza delle seguenti condizioni:
A. Essiccante non presente o danneggiato.
B. I pozzetti dei pannelli sono scoloriti (es. PHO, vari antimicrobici).
4. Lasciare equilibrare i pannelli a temperatura ambiente prima della reidratazione. I pannelli possono essere impilati e
coperti con un coperchio pulito. Tutti i pannelli estratti dalla confezione devono essere utilizzati il giorno stesso oppure
devono essere eliminati.
Preparazione dell'inoculo
CLSI raccomanda di verificare periodicamente le densità degli inoculi mediante conta delle colonie. Per le raccomandazioni
relative alla conta delle colonie, consultare il documento di CLSI M07-A10. I risultati attesi per E. coli ATCC 25922 devono
essere pari o quasi a 5 x 10
preparazione dell'inoculo, in particolare con i metodi manuali dipendenti dalla tecnica come il sistema Prompt o un inoculo
preparato senza l'aiuto di un dispositivo fotometrico.
Nota: i prodotti MicroScan non supportano le tecniche della fase stazionaria e logaritmica.
1. Tecnica dello standard di torbidità - Metodo primario per l'inoculo
La tecnica dello standard di torbidità è consigliata per l'inoculazione diretta di tutti i cocchi Gram positivi aerobi o per il
rilevamento di stafilococchi resistenti alla meticillina.
A. Servendosi di un bastoncino, di un anello o di un tampone sterile, prelevare dalla superficie 4–5 colonie grandi o
5-10 colonie piccole ben isolate, morfologicamente simili, cresciute su una piastra di agar senza inibitori per 18–24
ore.
B. Emulsionare in 3 mL di acqua per inoculo (acqua deionizzata sterilizzata in autoclave).
C. Tappare bene e miscelare la sospensione su vortex per 2–3 secondi. La torbidità finale deve essere equivalente
a quella di uno standard di torbidità 0,5 McFarland. È possibile ottenere una torbidità equivalente utilizzando un
turbidimetro MicroScan con un intervallo di 0,08 ± 0,02.
D. Pipettare 0,1 mL (100 µL) della sospensione standardizzata in 25 mL di acqua per inoculo con PLURONIC. Tappare
bene. Capovolgere 8–10 volte per mescolare.
2. Sistema Prompt
Il sistema Prompt può essere utilizzato per i cocchi Gram positivi a crescita più rapida. Per un utilizzo corretto del sistema
Prompt, consultare il Prompt Inoculation Procedural Manual (Manuale delle procedure del Sistema Prompt).
Nota: usare con cautela. L'inoculo degli organismi che non raggiungono le dimensioni necessarie potrebbe risultare
insufficiente e alterare i risultati del test di sensibilità e identificazione. Inoltre, il metodo Prompt potrebbe aumentare la
conta delle colonie di stafilococchi, che potrebbe risultare maggiore dell'intervallo previsto da CLSI. Una conta elevata
delle colonie potrebbe incidere negativamente sui risultati degli antibiotici interessati dall'inoculo. Consultare la sezione
Limitazioni per gli antimicrobici con nota dipendenza dall'inoculo.
Reidratazione/inoculazione dei pannelli
La reidratazione e l'inoculazione vengono eseguiti utilizzando il sistema RENOK con set Inoculator-D (B1013-4). Per l'uso,
consultare RENOK Operator's Manual (Manuale dell'operatore del sistema RENOK). Se si utilizza un sistema alternativo,
reidratare con 115 ± 10 μL di acqua per inoculo (PLURONIC). La concentrazione finale nei pozzetti deve essere pari a
3–7 x 10 CFU/mL. Per garantire la vitalità e la purezza dell'organismo in esame, preparare una piastra di isolamento
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strisciando l'inoculo su una piastra di agar idonea e incubandolo alle giuste condizioni. Se sulla piastra di isolamento sono
presenti due o più tipi di colonie, reisolare le colonie e ripetere l'analisi.
Copertura dei substrati con olio minerale
1. Servendosi di una boccetta contagocce, ricoprire i pozzetti ARG e URE con almeno 3 gocce di olio minerale. (I pozzetti
in oggetto sono sottolineati sul pannello.)
2. Ricoprire interamente i terreni contenuti nei pozzetti con olio minerale, senza farlo fuoriuscire.
NOTA: gli strumenti WalkAway SI e WalkAway plus (e gli strumenti WalkAway aggiornati con la funzione automatica di
overlay dell'olio) aggiungono automaticamente l'olio ai pozzetti appropriati.
Incubazione
1. I pannelli possono essere incubati in un sistema WalkAway o in un termostato qualsiasi seguendo le fasi indicate:
C29870–AD
5 CFU/mL per le concentrazioni finali del test. 1 L'utente deve prestare grande attenzione alla
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