Beckman Coulter MicroScan B1016-138 Manuel D'utilisation page 33

VERFAHREN
Vorbereitung der Panels
1. Die zu verwendenden Panels aus dem Lager entnehmen. Keine Panels verwenden, deren Verpackung nicht mehr
unversehrt ist (geöffnet, punktiert oder eingerissen).
2. Den Beutel aufschneiden und das Panel entnehmen.
Folienbeutel nehmen.
3. Panels dürfen nicht verwendet werden, wenn Folgendes der Fall ist:
A. Trockenmittel fehlt oder ist beschädigt.
B. Testfelder der Panels sind verfärbt (z. B. PHO, diverse Antibiotika).
4. Die Panels vor der Rehydrierung Raumtemperatur annehmen lassen. Die Panels können aufeinandergestapelt werden.
Ganz oben eine saubere Abdeckplatte aufsetzen. Geöffnete Panels, die nicht am selben Tag verwendet werden, müssen
entsorgt werden.
Inokulum-Vorbereitung
Von der CLSI wird eine regelmäßige Überprüfung der Inokulumdichte durch Koloniezählung empfohlen. Für Empfehlungen
zur Koloniezählung siehe CLSI-Dokument M07-A10.
der Endkonzentration des Tests bei ca.
Inokulumvorbereitung walten lassen, insbesondere bei manuellen, technikabhängigen Methoden wie dem Prompt-System
oder ohne Fotometer hergestelltem Inokulum.
Hinweis: Log- und Stationär-Phasen-Verfahren werden für MicroScan-Produkte nicht unterstützt.
1. Standardtrübungstechnik – primäre Inokulum-Methode
Die Standard-Trübungstechnik wird für die direkte Inokulation aller aeroben grampositiven Kokken oder für den Nachweis
von methicillinresistenten Staphylokokken empfohlen.
A. Mit einem sterilen Applikatorstäbchen, einer sterilen Impföse oder einem sterilen Tupfer die Oberfläche von 4–5
größeren oder 5–10 kleineren morphologisch ähnlichen und klar voneinander isolierten Kolonien auf einer nicht
hemmenden 18–24 Stunden inokulierten Agarplatte berühren.
B. In 3 mL Inokulumwasser (autoklaviertem, entionisiertem Wasser) emulgieren.
C. Das Gefäß gut verschließen und die Suspension 2–3 Sekunden lang mittels Vortex mischen. Die Endtrübung sollte
einem McFarland-Trübungsstandard von 0,5 entsprechen. Eine gleichwertige Trübung kann unter Verwendung
eines MicroScan-Trübungsmessgeräts mit einem Bereich von 0,08 ± 0,02 erzielt werden.
D. 0,1 mL (100 μL) der standardisierten Suspension in 25 mL Inokulumwasser mit PLURONIC pipettieren. Gefäß
dicht verschließen. Durch 8- bis 10-maliges Drehen mischen.
2. Prompt-System
Das Prompt-System kann für schneller proliferierende grampositive Kokken verwendet werden. Siehe zur korrekten
Verwendung des Prompt-Systems das Dokument „Prompt Inoculation Procedural Manual" (Gebrauchsanleitung für das
Prompt-Inokulationssystem).
Hinweis: Mit Vorsicht verwenden. Bei Organismen, die die Größenanforderungen nicht erfüllen, kann es zu einer
Unterinokulation kommen. Diese Unterinokulation kann die Ergebnisse der Empfindlichkeits- und Identifikationstests
verfälschen. Außerdem können bei der Prompt-Methode erhöhte KBE-Werte für Staphylokokken auftreten, die
größer sein können als die CLSI-Sollwerte.
inokulumabhängig sind, beeinträchtigt werden. Im Abschnitt „Grenzen des Verfahrens" ist nachzulesen, für welche
Antibiotika eine Inokulumabhängigkeit bekannt ist.
Rehydrierung/Inokulation des Panels
Die Rehydrierung und Inokulierung wird mit dem RENOK-System und Inoculators-D (B1013-4) durchgeführt. Dieses ist im
„RENOK Operator's Manual" (RENOK-Bedienerhandbuch) beschrieben. Wenn ein anderes System verwendet wird, mit 115
±10 μL Inokulumwasser (PLURONIC) rehydrieren. Im Testfeld sollte eine Endkonzentration von 3–7 X 10
werden. Um die Lebensfähigkeit und die Reinheit des getesteten Organismus zu gewährleisten, muss eine Reinheitskontrolle
angefertigt werden. Hierzu wird das Inokulum auf einer geeigneten Agarplatte ausgestrichen und unter entsprechenden
Bedingungen inkubiert. Wenn auf dieser Platte zwei oder mehr Kolonietypen entstehen, die Kolonien erneut isolieren und
nochmals testen.
Ölüberschichtung bestimmter biochemischer Substrate
1. Die ARG- und URE-Testfelder mit mindestens 3 Tropfen Mineralöl aus einer Tropferflasche überschichten. (Diese
Testfelder sind auf dem Panel unterstrichen.)
2. Das Medium in den Testfeldern muss vollständig mit Mineralöl bedeckt sein, doch das Öl darf nicht überlaufen.
C29870–AD
Bei Lagerung im Kühlschrank das Panel sofort aus dem
Die erwarteten Ergebnisse für E. coli ATCC 25922 sollten bei
5 x 10 5 CFU/mL liegen.
Durch die erhöhten KBE-Werte können Antibiotikaergebnisse, die
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1 Der Benutzer sollte besondere Sorgfalt bei der
5 CFU/mL erzielt