Beckman Coulter MicroScan B1016-138 Manuel D'utilisation page 18

Vortex
Papier pour étiquettes à code-barres (B1018-129)
Couvercles de plateaux WalkAway (B1018-18)
PROCÉDURE
Préparation des plaques
1. Retirer les plaques à utiliser de la zone de stockage. Ne pas les utiliser si l'intégrité de l'emballage est compromise
(emballage décollé, percé ou déchiré).
2. Ouvrir le sachet et retirer la plaque. En cas de stockage dans un réfrigérateur, retirer la plaque immédiatement du sachet
en aluminium.
3. Les plaques ne doivent pas être utilisées si l'une des conditions suivantes est remplie :
A. Produit déshydratant absent ou détérioré.
B. Puits des plaques décolorés (p. ex., PHO, différents antimicrobiens).
4. Laisser les plaques s'équilibrer à température ambiante avant la réhydratation. Les plaques peuvent être empilées en
plaçant un couvercle propre au-dessus. Toutes les plaques ouvertes doivent être utilisées dans la même journée ou
jetées.
Préparation de l'inoculum
Le CLSI recommande le contrôle périodique des densités d'inoculum en effectuant des numérations de colonies. Consulter
le document M07-A10 du CLSI pour connaître les recommandations en matière de numération des colonies. Les résultats
attendus pour E. coli ATCC 25922 sont à peu près équivalents à 5 x 10
L'utilisateur doit prêter une attention particulière à la préparation de l'inoculum, en particulier avec les méthodes manuelles qui
dépendent de la technique utilisée, par exemple, le système Prompt ou la préparation d'un inoculum sans l'aide d'un dispositif
photométrique.
Remarque : les techniques en phase logarithmique et stationnaire ne sont pas prises en charge par les produits MicroScan.
1. Technique turbidimétrique standard — principale méthode d'inoculum
La technique du standard de turbidité est recommandée pour l'inoculation directe de tous les coques Gram positif
aérobies ou pour la détection des staphylocoques résistants à la méticilline.
A. À l'aide d'un applicateur stérile, d'une anse ou d'un écouvillon, prélever la surface de 4 à 5 grandes colonies ou
de 5 à 10 petites colonies bien isolées et de morphologie similaire issues d'une boîte de gélose non inhibitrice de
18 à 24 heures.
B. Mettre en suspension dans 3 mL d'eau pour inoculum (eau stérilisée et désionisée).
C. Bien fermer le bouchon et mélanger la suspension au vortex pendant 2 à 3 secondes. La turbidité finale doit être
équivalente à celle d'un standard de turbidité de 0,5 McFarland. Une turbidité équivalente peut être obtenue en
utilisant le turbidimètre MicroScan avec une valeur de 0,08 ± 0,02.
D. Pipeter 0,1 mL (100 μL) de suspension standardisée dans 25 mL d'eau d'inoculum avec PLURONIC. Bien fermer
le bouchon. Retourner 8 à 10 fois pour mélanger.
2. Système Prompt
Le système Prompt peut être utilisé pour les coques Gram positif à croissance plus rapide. Consulter le Prompt
Inoculation Procedural Manual (Manuel d'utilisation de l'inoculation Prompt) afin de connaître les recommandations
d'utilisation du système Prompt.
Remarque : à utiliser avec précaution. Une sous-inoculation peut se produire avec des organismes qui ne répondent
pas aux exigences de taille et qui pourraient générer des résultats de test de sensibilité et d'identification incorrects. De
plus, le nombre de colonies de staphylocoques peut être élevé avec la méthode Prompt et peut être supérieur à la plage
attendue par le CLSI. Un nombre de colonies élevé peut nuire aux résultats de l'antibiotique affectés par inoculum. Se
référer à la section Limites pour les agents antimicrobiens connus comme dépendants de l'inoculum.
Réhydratation/inoculation des plaques
La réhydratation et l'inoculation se font à l'aide du système RENOK avec des Inoculators-D (B1013-4). Consulter le RENOK
Operator's Manual (Manuel de l'opérateur RENOK). Si un système alternatif est utilisé, réhydrater avec 115 ± 10 μL d'eau
pour inoculum (PLURONIC). Une concentration finale dans les puits de 3–7 x 10
viabilité et la pureté de l'organisme testé, une boîte témoin doit être préparée en ensemençant l'inoculum par stries sur une
boîte de gélose adaptée et en l'incubant dans des conditions appropriées. Si deux types de colonies ou plus sont présents
sur la boîte témoin, isoler de nouveau les colonies et procéder à un nouveau test.
C29870–AD
CFU/mL pour les concentrations finales testées
5
5 UFC/mL doit être atteinte. Pour garantir la
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