Beckman Coulter MicroScan B1016-138 Manuel D'utilisation page 237

POSTUPAK
Priprema panela
1. Panele koje ćete koristiti izvadite iz mjesta na kojem ih čuvate. Nemojte ih koristiti ako je pakovanje oštećeno (nije
tvornički zatvoreno, probušeno je ili potrgano).
2. Razrežite vrećicu i izvadite panel. Ako ste ga čuvali u hladnjaku, odmah izvadite panel iz vrećice od folije.
3. Paneli se ne smiju koristiti ako je došlo do bilo čega od sljedećeg:
A. Desikanta nema ili je oštećen.
B. Jažice panela promijenile su boju (primjerice, PHO, razna antimikrobna sredstva).
4. Pustite da se temperatura panela prije rehidracije izjednači sa sobnom temperaturom. Panele možete poslagati jedan
na drugi tako da na vrhu bude čista pločica za prekrivanje. Sve otvorene panele treba upotrijebiti istog dana ili ih baciti.
Priprema inokuluma
CLSI preporučuje periodičku provjeru gustoće inokuluma prebrojavanjem kolonija. Preporuke za prebrojavanje kolonija
potražite u dokumentu CLSI M07-A10.
5 x 10 5 CFU/mL za konačne koncentracije testa.
metode koje ovise o tehnici, poput sustava Prompt ili pripreme inokuluma bez pomoći fotometrijskog uređaja.
Napomena: proizvodi MicroScan ne podržavaju tehnike vezane uz logaritamsku i stacionarnu fazu.
1. Tehnika sa standardom zamućenosti – metoda primarne inokulacije
Tehnika sa standardnom zamućenosti preporučuje se za izravnu inokulaciju svih aerobnih gram-pozitivnih koka ili
detekciju stafilokoka otpornih na meticilin.
A. Koristeći sterilni aplikacijski štapić, petlju ili štapić za uzorke dodirnite površinu 4 – 5 većih ili 5 – 10 manjih
morfološki sličnih, dobro izoliranih kolonija s neinhibitorske pločice s hranjivom podlogom koja je stajala između
18 i 24 sata.
B. Emulgirajte u 3 mL vode za inokulum (autoklavirane deionizirane vode).
C. Čvrsto zatvorite i miješajte suspenziju 2 – 3 sekunde. Konačna zamućenost trebala bi biti ekvivalentna vrijednosti
0,5 po McFarlandovom standardu zamućenosti. Ekvivalentna zamućenost može se postići primjenom mjerača
zamućenosti MicroScan s rasponom od 0,08 ± 0,02.
D. Pipeta s 0,1 mL (100 μL) standardizirane suspenzije u 25 mL vode za inokulum s PLURONIC-om. Čvrsto zatvorite.
Preokrenite 8 – 10 puta da biste pomiješali sadržaj.
2. Sustav Prompt
Sustav Prompt može se upotrebljavati za brži rast gram-pozitivnih koka. Informacije o pravilnoj uporabi sustava Prompt
potražite u priručniku Prompt Inoculation Procedural Manual (Priručnik za postupke inokulacije pomoću sustava Prompt).
Napomena: upotrebljavati oprezno.
potrebnu veličinu, što bi moglo uzrokovati netočne rezultate testiranja podložnosti i identifikacije. Osim toga, broj
kolonija stafilokoka izbrojen metodom Prompt može biti povišen te veći od CLSI očekivanog raspona. Povećan broj
kolonija može negativno utjecati na antibiotske rezultate na koje utječe inokulum. Pogledajte odjeljak Ograničenja za
antimikrobna sredstva za koja je poznato da su ovisna o inokulumu.
Rehidracija/inokulacija panela
Rehidracija i inokulacija izvode se pomoću sustava RENOK s pomoću uređaja Inoculators-D (B1013-4). Za uporabu pogledajte
RENOK Operator's Manual (Priručnik za operatere sustava RENOK). Ako koristite neki drugi sustav, rehidrirajte sa 115 ± 10 μL
vode za inokulum (PLURONIC). Trebate postići konačnu koncentraciju u jažici od 3 – 7 x 10
održivost i čistoća testiranih organizama, pločicu za čistoću treba pripremiti razvlačenjem inokuluma na odgovarajućoj pločici
s hranjivom podlogom i inkubacijom u odgovarajućim uvjetima. Ako su na pločici za čistoću prisutne dvije vrste kolonija ili više
njih, ponovno izolirajte kolonije i ponovite testiranje.
Biokemijsko prekrivanje
1. S pomoću bočice spremnika prekrijte jažice ARG i URE s najmanje 3 kapi mineralnog ulja. (Te su jažice podcrtane na
panelu.)
2. Mediji u jažicama moraju biti posve prekriveni mineralnim uljem, ali se ulje ne smije prelijevati iz jažica.
NAPOMENA: instrumenti WalkAway SI i WalkAway plus (te instrumenti WalkAway nadograđeni značajkom
automatiziranog prekrivanja uljem) automatski dodaju ulje u odgovarajuće jažice.
Inkubacija
1. Paneli se mogu inkubirati u sustavu WalkAway ili neovisno primjenom sljedećih koraka:
A. Da biste osigurali ujednačenu termalnu distribuciju tijekom inkubacije, panele slažite u grupe od 3 – 5 komada.
C29870–AD
Očekivani rezultat za E. coli ATCC 25922 trebao bi vrlo malo odstupati od
1 Korisnik treba vrlo pažljivo pripremati inokulum, osobito kada koristi ručne
Do nedovoljne inokulacije može doći kod organizama koji ne zadovoljavaju
237 of 339
CFU/mL. Da bi se osigurale
5