Beckman Coulter MicroScan B1016-138 Manuel D'utilisation page 19

Tests biochimiques recouverts
1. À l'aide d'un compte-gouttes, recouvrir les puits ARG et URE avec au minimum 3 gouttes d'huile minérale. (Ces puits
sont soulignés sur la plaque.)
2. Les milieux dans les puits doivent être complètement couverts d'huile minérale, mais l'huile ne doit pas déborder des
puits.
REMARQUE : les instruments WalkAway SI et WalkAway plus (et l'instrument WalkAway mis à niveau avec la fonction
ajout d'huile automatique) ajoutent automatiquement l'huile dans les puits correspondants.
Incubation
1. Les plaques peuvent être incubées dans un système WalkAway ou incubées hors ligne en procédant comme suit :
A. Pour assurer une répartition thermique homogène durant l'incubation, empiler les plaques par groupes de 3 à 5.
B. Placer un couvercle propre sur chaque pile de plaques pour éviter toute évaporation. Les couvercles peuvent être
réutilisés. Ne pas décontaminer les couvercles à l'alcool. Ils peuvent être nettoyés à l'eau et au savon. Bien rincer
et laisser sécher à l'air libre.
C. Incuber les plaques pendant 16–20 heures à 35 °C dans une étuve pas à CO
Lecture des plaques
Les plaques peuvent être lues manuellement en utilisant une lampe de lecture pour plaques en microdilution MicroScan, et
les résultats notés sur un instrument MicroScan (systèmes autoSCAN-4 et WalkAway). Consulter le LabPro Operator's Guide
(Manuel d'utilisation LabPro) pour obtenir les instructions concernant la lecture des plaques avec les instruments MicroScan.
1. Après 16 à 20 heures d'incubation, retirer les plaques de l'incubateur.
2. Essuyer le dessous de la plaque avec un morceau d'essuie-tout non pelucheux pour enlever la condensation ou les
éventuels débris.
3. Lire les plaques uniquement si le puits de contrôle est clair et si le puits de contrôle de la croissance est trouble. Ne
pas lire l'antimicrobien si le puits de contrôle est trouble ou si aucune croissance n'a eu lieu dans le puits de croissance.
La croissance dans les puits apparaît sous la forme d'un trouble, qu'il s'agisse d'un trouble blanc réparti dans tout le
puits, d'un bouton blanc au centre du puits ou d'une croissance en grains fins répartis dans tout le puits. Une croissance
insuffisante se traduit par une légère blancheur dans le puits ou par un bouillon transparent.
4. Si les résultats sont lus manuellement, les noter sur la feuille de travail correspondante.
5. Lecture des sensibilités aux agents antimicrobiens (CMI)
A. Lire les résultats de tous les antibiotiques, CV, MS, NOV, OPT, NACL et BAC contre un fond noir (éclairé de façon
indirecte).
B. Effectuer le test β-lactamase pour staphylocoques avec une valeur de CMI de la pénicilline ≤ 0,12 μg/mL
C. Noter les résultats CMI comme expliqué ci-dessous :
a. Après 16 à 20 heures d'incubation, considérer la CMI comme étant la concentration d'antimicrobien la plus
basse montrant une inhibition de la croissance.
b. Lorsque la croissance a lieu dans toutes les concentrations d'antimicrobien, la CMI est considérée comme
étant supérieure (>) à la plus haute concentration testée.
c. En l'absence de croissance pour l'ensemble des concentrations testées d'un antimicrobien, la CMI est
considérée comme inférieure ou égale (≤) à la plus faible des concentrations testées.
d. Un puits clair dans une série de puits présentant des croissances, par exemple, croissances à 1, 2 et 8 µg/mL
mais pas à 4 μg/mL est appelé « puits sauté » et doit être ignoré.
e. Une croissance dans des puits isolés indique une contamination. Le test doit être relancé.
f. Pour les staphylocoques avec l'oxacilline, toute croissance doit être considérée comme significative.
D. La détection précise de la résistance requiert des temps d'incubation étendus comme indiqué ci-dessous :
Incubation
24 heures
24–48 heures
1. Une incubation de 24 heures n'est pas nécessaire pour l'espèce Staphylococcus dans les plaques contenant le puits de test à la céfoxitine.
E. La performance de la vancomycine avec les plaques MicroScan a été comparée aux méthodes de référence par
microdilution en bouillon du CLSI. Les résultats de la vancomycine avec les staphylocoques après 16–20 heures
C29870–AD
Organism (Germe)
Entérocoques
Staphylocoques
Streptocoques
Entérocoques
Antimicrobiens
Test de synergie kanamycine
Oxacilline
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Test de synergie kanamycine
Synergie streptomycine
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