Beckman Coulter MicroScan B1016-138 Manuel D'utilisation page 151

w przypadku których występuje efekt inokulum.
inokulum, są przedstawione w rozdziale dotyczącym ograniczeń procedury.
Powtórne uwodnienie/inokulacja panelu
Rehydratacja i inokulacja panelu są przeprowadzane za pomocą systemu RENOK z zestawem Inoculators-D (B1013-4).
Szczegóły można znaleźć w dokumencie RENOK Operator's Manual (Podręcznik użytkownika systemu RENOK). Jeżeli
stosowany jest inny system, należy zawartość studzienki powtórnie uwodnić za pomocą 115 ±10 µL wody inokulacyjnej
(PLURONIC). Należy osiągnąć końcowe stężenie w studzience na poziomie 3–7 x 10
żywotności i czystości badanych drobnoustrojów należy przygotować posiew redukcyjny przez rozprowadzenie inokulum na
odpowiednim podłożu agarowym i inkubację w odpowiednich warunkach. Jeżeli na płytce (podłożu) występują co najmniej
dwa rodzaje kolonii, należy je ponownie wyizolować i powtórzyć badanie.
Nakładanie na testy biochemiczne
1. Za pomocą zakraplacza pokryć studzienki ARG i URE co najmniej 3 kroplami oleju mineralnego. (Studzienki te są
podkreślone na panelu.)
2. Podłoże w studzienkach musi być w pełni pokryte olejem mineralnym, jednakże olej nie powinien z nich wypływać.
UWAGA: analizatory WalkAway SI i WalkAway plus (oraz analizatory WalkAway z dodatkową opcją automatycznego
nakładania oleju) automatycznie dodają olej do właściwych studzienek.
Inkubacja
1. Panele można inkubować w systemie WalkAway lub zewnętrznie w następujący sposób:
A. Aby zapewnić równomierną dystrybucję ciepła w trakcie inkubacji, panele należy ustawić w grupach jeden na
drugim po 3–5 sztuk.
B. Umieścić przezroczystą pokrywkę na górze każdej grupy paneli, aby zapobiec parowaniu. Pokrywek można
używać wielokrotnie. Nie wolno odkażać pokrywek alkoholem. Można je czyścić wodą z mydłem. Należy je
dobrze opłukać i pozostawić do wyschnięcia na powietrzu.
C. Inkubować panele przez 16–20 godzin w temperaturze 35°C w inkubatorze niezawierającym CO
Odczyt z paneli
Panele mogą być odczytywane ręcznie za pomocą przeglądarki mikrorozcieńczeń MicroScan, a wyniki zapisywane
w analizatorze MicroScan (systemy autoSCAN-4 i WalkAway). Szczegółowe instrukcje dotyczące odczytu paneli za pomocą
analizatorów MicroScan można znaleźć w dokumencie LabPro Operator's Guide (Instrukcja obsługi systemu LabPro).
1. Panele należy wyjąć z inkubatora po 16–20 godzinach inkubacji.
2. Wytrzeć spód panelu niestrzępiącą się ściereczką w celu usunięcia wszystkich możliwych skroplin i zanieczyszczeń.
3. Panele można odczytywać tylko wówczas, gdy studzienka kontrolna jest przezroczysta, a studzienka kontroli wzrostu
jest mętna. Jeżeli studzienka kontrolna jest mętna lub gdy brak jest wzrostu w studzience kontroli wzrostu, nie należy
odczytywać środków przeciwbakteryjnych. Wzrost w studzience obserwuje się jako zmętnienie, które może przyjąć
formę zamglenia na całej powierzchni studzienki, białego punktu w jej środkowej części lub wyraźnego wzrostu
ziarnistego w całej objętości. Za niewystarczający uważa się wzrost w postaci lekkiego zabielenia studzienki oraz
sytuację, kiedy bulion jest przezroczysty.
4. Jeżeli wyniki są odczytywane ręcznie, należy zapisać je we właściwym arkuszu roboczym.
5. Odczytywanie wrażliwości na antybiotyki (MIC)
A. Odczytać wszystkie studzienki zawierające środki przeciwbakteryjne oraz CV, MS, NOV, OPT, NACL i BAC na
czarnym tle (oświetlonym niebezpośrednio).
B. Wykonać test na β-laktamazę dla gronkowców, u których MIC penicyliny wynosi ≤ 0,12 μg/mL.
C. Zapisać wyniki MIC jak poniżej:
a. Po 16–20 godzinach inkubacji zapisać wartość MIC jako najniższe stężenie antybiotyku, przy którym
obserwuje się zahamowanie wzrostu.
b. Jeżeli wzrost występuje przy wszystkich stężeniach środka przeciwbakteryjnego, wartość MIC zapisuje się
jako większą niż (>) najwyższe stężenie.
c. Jeżeli wzrost nie występuje w żadnym ze stężeń antybiotyku, MIC jest zapisywany jako mniejszy lub równy
od (≤) najniższego stężenia.
d. Przezroczysta studzienka pomiędzy studzienkami wykazującymi wzrost bakterii (np.
i 8 μg/mL i brak wzrostu przy 4 μg/mL) zwana jest studzienką pomijaną i powinna być zignorowana.
e. Wzrost punktowy w izolowanych studzienkach wskazuje na zanieczyszczenie. Test należy powtórzyć.
f. W przypadku wzrostu gronkowców w studzienkach z oksacyliną, jakikolwiek wzrost powinien być traktowany
jako znaczący.
C29870–AD
Środki przeciwbakteryjne, w przypadku których występuje efekt
151 of 339
CFU/mL. W celu potwierdzenia
5
.
2
1
wzrost przy 1, 2