Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 91

Well Reaktif
IDX
AGL2 1 damla 0,05 N NaOH ekleyin. Sonucu kaydetmeden
önce, en az 5 saniye, en fazla 5 dakika bekleyin. NPC
BDF
kontrol kuyucuğuyla karşılaştırın.
AGAL
NAG
CELL
NGAL
1. Tüm kuyucuk boyunca pozitif bir renk bulunmayabilir.
2. Bazı mayalarda pembe bir renk bulunabilir. Bu, pozitif reaksiyon olarak kabul edilmelidir.
TANIMLAMA REAKSİYONLARININ PRENSİPLERİ
Amino asit β-naftilamid substratları (HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR, AARG, LYAL, ALA, STY, HIS)
— Substrat uygun enzim tarafından hidrolize edildiğinde (genellikle bir amino asit arilamidaz), β-naftilamin serbest bırakılır.
β-naftilamin, p-dimetilaminosinnamaldehidin (Peptidaz reaktifinde) eklenmesiyle tespit edilir ve bu da pembe ila mor renkte bir
kompleks oluşturur.
NOT: Amino asit β-naftilamidi ayıran enzim, amino asit arilamidazdır. "Aminopeptidaz" terimi, sıklıkla arilamidaz ile eş anlamlı
olarak kullanılır, ancak aslında farklı özgünlüklere sahip bir enzimi temsil eder (bir aminopeptidaz, N-terminal amino asidi bir
peptidden ayırır). Bir arilamidaz ve bir aminopeptidaz, aynı amino asit β-naftilamid substratını hidrolize edebilir. Bu nedenle,
panelin mutlaka farklı ve benzersiz enzimleri ölçmesi gerekmez. Tek bir arilamidaz, birkaç amino asit β-naftilamidi hidrolize
edebilir.
Karbonhidratlar (SUC1, SUC2, TRE) —Sukroz ve trehaloz kullanımı, klorofenol kırmızısının mordan sarıya dönüşmesine
neden olan bir pH düşüşüyle sonuçlanır. Bu karbonhidrat reaksiyonları seçicidir ve geleneksel reaksiyonlara uygun olmayabilir.
Nitrofenil Substratlar (AGL1, BGL, BGAL, AGL2, BDF, AGAL, NAG, CELL, NGAL) — Uygun enzim varsa, substrat orto
veya para nitrofenol bırakarak ayrılır. Bu bileşikler alkalin pH'ta sarıdır. Reaksiyon asidik bir pH'ta gerçekleşirse inkübasyondan
sonra sonuçlar okunmadan önce NaOH eklenmelidir. Sodyum hidroksit eklenmeden önce kuyucukar renksiz veya soluk sarı
olabilir.
İndoksil Fosfataz (IDX) — İndoksil fosfat, indoksili serbest bırakacak şekilde bir fosfataz tarafından ayrılır.
çözünmeyen mavi veya mavi-gri çökelti olan indigo mavisi oluşturacak şekilde oksijenle birleştirir.
Üre (URE) — Üre, amonyak ve karbondioksit oluşturacak şekilde üreazdan ayrılır. Amonyak (amonyum karbonat şeklinde)
pH'ta fenol kırmızısının sarıdan kırmızıya değişmesi ile tespit edilen bir artışa neden olur.
ORGANİZMA TANIMLAMASI
MicroScan Hızlı Maya Biyotip Kod Kitabı bilinmeyen test organizmalarının tanımlanması için kullanılır. Bu kod kitabı tanımlama
panelinde bulunan testler için MicroScan'in veri tabanı kullanılarak oluşturulmuştur. Maya Kod Kitabı, Hızlı Maya Tanımlama
Panelindeki 27 testin bilgisayar analizine dayanmaktadır. Test sonuçları, kod kitabının bir tür tanımlamasını ve kümülatif bir
göreceli tanımlama olasılığını listelediği 9 basamaklı bir biyotip numarasına dönüştürülür. Tüm olası tanımlamalar, %99,9'luk
kümülatif toplama en yüksek olasılıktan başlayarak azalan sırada yazılmıştır.
Kod kitabında bulunamayan bir biyotip numarası mevcut olması durumunda ilk önce bir prosedür hatasından şüphelenilmelidir;
örneğin, biyotip numarasının yanlış eklenmiş veya bir reaksiyonun hatalı bir şekilde kaydedilmiş olması. Biyotip numarası
doğruysa karışık bir kültür olasılığı kontrol edilmeli ve organizma, yeterince bulanık bir hücre süspansiyonu kullanılarak ve
özel önem verilerek yeniden test edilmelidir. Yeniden test yaptığınızda aynı sonuçları elde ederseniz Beckman Coulter web
sitesinde Biyotip Arama Hizmetine başvurun veya yerel dağıtımcınıza danışın.
METODUN SINIRLILIKLARI
1. Hızlı Maya Tanımlama Panelleri, maya ve maya benzeri organizmaların (ör. Prototheca) tanımlanması için tasarlanmıştır.
Aşırı hifal üretim olan organizmalara özen gösterilmelidir.
2. Belirli bir biyotip numarası için birden fazla tür tanımlaması listeleniyorsa, ek testler gerekli olabilir. Maya ve maya
benzeri organizmaların kabul edilen tanımlama prosedürleri arasında kolonyal morfoloji, yüksek sıcaklıkta üreme,
fenoloksidaz agar üzerinde pigment oluşumu ve renk bulunur.
ortamdaki mikroskobik morfoloji de bu organizmaların tanımlanmasına yardımcı olabilir.
prosedürlerine bakın.
3. Kromojenik sonuçlardaki değişkenlik, sistemin aşırı veya yetersiz inokülasyonu nedeniyle oluşabilir.
performans için doğru inokülüm konsantrasyonu elde etmek amacıyla her inokülüm, türbidite standardıyla
karşılaştırılmalıdır.
KALİTE KONTROL
Tanımlama substratlarının kabul edilebilirliği reaksiyonları bilinen organizmalarının test edilmesi yoluyla kontrol edilmelidir.
Önerilen MicroScan kontrol organizmaları için her bir reaksiyon sonucu, bu kılavuzda yer alan Kalite Kontrol Tablosunda
bulunmaktadır.
C29879–AB
5,6,7,8,9,10,11,12,13
Pozitif
Herhangi bir Mavi
tonu
Herhangi bir Sarı
2
tonu
Tipik morfolojiyi ortaya çıkarmak için tasarlanmış
91 of 141
Negatif
Berrak
Berrak
Uygun mikoloji referans
İndoksil,
Optimum