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Well
Réactif
SUC1
SUC2
TRE
AGL1
Comparer au puits de contrôle NPC.
BGL
BGAL
URE
IDX
AGL2
Ajouter 1 goutte de 0,05 N NaOH. Attendre au
BDF
moins 5 secondes, mais pas plus de 5 minutes, pour
enregistrer le résultat. Comparer au puits de contrôle
AGAL
NPC.
NAG
CELL
NGAL
1. Il est possible que la couleur positive ne soit pas présente sur tout le puits.
2. Certaines levures peuvent présenter une couleur rose. Cela doit être considéré comme une réaction positive.
PRINCIPES DES RÉACTIONS D'IDENTIFICATION
Substrat d'acide aminé β-naphthylamide (HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR, AARG, LYAL, ALA, STY, HIS)
- Une fois le substrat hydrolysé par l'enzyme adaptée (généralement un acide aminé arylamidase), de la β-naphthylamine est
libérée. La β-naphthylamine est détectée par l'ajout du p-diméthylaminocinnamaldéhyde (dans le réactif Peptidase), qui créé
un complexe de couleur rose à violette.
REMARQUE : l'enzyme qui permet de fendre un acide aminé β-naphthylamide est un acide aminé arylamidase. Le terme
« aminopeptidase » est fréquemment utilisé comme synonyme d'arlamidase, mais il s'agit en réalité d'une enzyme aux
spécificités différentes (un aminopeptidase fend l'acide aminé N-terminal d'un peptide). Un arylamidase et un aminopeptidase
peuvent hydrolyser le même substrat d'acide aminé β-naphthylamide. Ainsi, la plaque ne mesure pas nécessairement des
enzymes différentes et uniques. Un seul arylamidase peut hydrolyser plusieurs acides aminés β-naphthylamides.
Glucides (SUC1, SUC2, TRE) - L'utilisation de saccharose et de tréhalose entraîne une chute du pH, qui entraîne le passage
du rouge chlorophénol du violet au jaune. Ces réactions de glucides sont sélectives et peuvent ne pas être conformes aux
réactions conventionnelles.
Substrats de nitrophényl (AGL1, BGL, BGAL, AGL2, BDF, AGAL, NAG, CELL, NGAL) - Si l'enzyme souhaitée est
présente, le substrat est fendu et dégage de l'ortho- ou du para-nitrophénol. À un pH alcalin, ces composants sont jaunes.
Si une réaction se produit à un pH acide, le NaOH doit être ajouté après l'incubation la lecture des résultats. Les puits sont
soit incolores soit jaune pâle avant l'ajout de l'hydroxyde de sodium.
Indoxyl Phosphatase (IDX) - L'Indoxyl phosphate est fendu par une phosphatase, et dégage alors de l'indoxyl. Ce dernier
se combine à l'oxygène pour former un bleu indigo, qui est un précipité insoluble bleu ou bleu-gris.
Urée (URE) - L'urée est divisée par l'uréase, pour former de l'ammoniaque et du dioxyde de carbone. L'ammoniaque (sous
forme de carbonate d'ammonium) entraîne une augmentation du pH, détectée par un changement du phénol rouge du jaune
au rouge.
IDENTIFICATION DE L'ORGANISME
Le Livre de code des biotypes de levures rapides MicroScan est utilisé pour identifier les organismes de test inconnus. Ce
livre de code a été généré à partir de la base de données de MicroScan pour les tests inclus sur la plaque d'identification. Le
livre de code des levures se base sur une analyse informatique des 27 tests de la plaque d'identification rapide des levures.
Les résultats des tests sont transformés en un numéro de biotype à 9 chiffres, pour lesquels le livre de code énumère une
identification d'espèce et une probabilité relative cumulée d'identification. Toutes les identifications possibles sont présentées,
en ordre de probabilité décroissant, avec un total cumulé de 99,9 %.
Si un biotype indisponible dans le livre de codes se produit, il convient d'abord d'envisager une erreur de procédure ; par
exemple, le biotype a été incorrectement ajouté ou une réaction a été faussement enregistrée. Si le biotype est correct, la
possibilité d'une culture mélangée doit être vérifiée et l'organisme doit être testé de nouveau, en insistant particulièrement sur
l'utilisation d'une suspension de cellules suffisamment trouble. Si les résultats sont identiques après réitération du test des
levures, consultez le Biotype Lookup Service sur le site internet de Beckman Coulter ou consultez votre revendeur local.
LIMITATIONS DE LA MÉTHODE
1. Les Plaques d'identification rapide des levures sont conçues pour l'identification des levures et des organismes
levuriformes (par ex., Prototheca). Il convient d'être vigilant quant aux organismes à croissance hyphale excessive.
2. Si plusieurs identifications d'espèce sont indiquées pour un nombre de biotype particulier, des tests supplémentaires
peuvent être nécessaires. Les procédures d'identification des levures et des organismes levuriformes comprennent
la morphologie coloniale, la croissance à température élevée, la formation de pigment, et la couleur sur une gélose
C29879–AB
Positif
Toute teinte de
brun ou jaune
Toute teinte de
2
jaune
Rose à magenta Claire/beige à
Toute teinte de
bleu
Toute teinte de
jaune
2
11 of 141
Négatif
Violet
Clair
jaune
Clair
Clair
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