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Sustratos
L-lisil-L-alanina-4-metoxi-β-naftilamida
L-alanina-4-metoxi-β-naftilamida
L-seril-L-tirosina-β-naftilamida
Urea
3-indoxil fosfato
1. Se utilizan diferentes formulaciones de los mismos sustratos.
3. Una vez que el panel se haya inoculado con el inóculo de 50 μL, golpee ligeramente cada lado del panel para facilitar
la mezcla con el sustrato.
NOTA: Si el panel se va a leer en el WalkAway o autoSCAN-4, también se debe inocular el pocillo de LOC.
Incubación
1. Apile los paneles en grupos de 3 a 5 con un panel cubridor sobre el panel superior para evitar la evaporación.
2. Incube los paneles inoculados durante 4 horas a 35-37 °C en un incubador sin CO
Lectura de los paneles
1. Retire el reactivo de peptidasa del refrigerador al menos 30 minutos antes de leer los paneles. El reactivo de peptidasa
puede precipitarse a 4 °C, pero se volverá a disolver a temperatura ambiente. No exponga el reactivo de peptidasa a
temperaturas elevadas para acelerar la redisolución del precipitado cristalino, ya que las temperaturas altas harán que
el reactivo se degrade.
2. Lea los paneles utilizando luz reflejada de un fondo blanco.
3. Después de 4 horas de incubación, añada los reactivos de peptidasa e hidróxido de sodio (NaOH) a los pocillos
correspondientes.
A. Añada 1 gota de reactivo de peptidasa a los pocillos de BNAC, HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR,
AARG, LYAL, ALA, STY y HIS. Deje que el color se desarrolle durante 30 segundos antes de registrar los
resultados. Los resultados se deben registrar en los 3 minutos posteriores a la adición de reactivo. La presencia
de CUALQUIER tonalidad de rosa o rojo en la solución en todo el pocillo, o en cualquier parte del pocillo, se
interpreta como positivo. Los colores se deben comparar con el pocillo de BNAC. Puede que algunos pocillos
aparezcan en un naranja más oscuro que el pocillo de BNAC. Estos se deben registrar como negativos. Las
reacciones solo son positivas si hay color rosa o rojo presente en la solución. El color de estos pocillos se
oscurecerá con el tiempo. Un color amarillo negativo puede convertirse en un color naranja más oscuro. Esto
debe interpretarse como reacción negativa.
NOTA: Tras añadir peptidasa al pocillo de BNAC, debe ser amarillo. Si hay algo de rosa o rojo, no debe usarse
el reactivo de peptidasa.
B. Añada 1 gota de 0,05 N de NaOH a los pocillos de AGL2, BDF, AGAL, NPC, NAG, CELL y NGAL. Espere al
menos 5 segundos, pero no más de 5 minutos, antes de registrar los resultados. Cualquier tonalidad de amarillo
debe registrarse como positivo. Compare los pocillos que contienen sustrato con el pocillo de NPC.
NOTA: Puede que estos pocillos aparezcan más oscuros que el pocillo de NPC. Esto debe interpretarse como
negativo, pero debe haber un color amarillo para que se considere positivo.
4. Se proporcionan dos pocillos de control para ayudar a interpretar las reacciones.
A. BNAC = control de β-naftilamida. Después de añadir el reactivo de peptidasa, este pocillo será de color amarillo.
B. NPC = control de nitrofenil. Este pocillo debe ser incoloro.
5. Consulte la sección RESULTADOS para obtener ayuda en la interpretación bioquímica.
NOTA: El WalkAway lee primero pocillos que no requieren reactivos, con el fin de evitar resultados modificados debido a
los gases de los reactivos que pueden quedar atrapados bajo la tapa de la bandeja; por tanto, las reacciones bioquímicas
no se pueden verificar manualmente.
C29879–AB
Abrev.
Sustratos
LYAL
p-nitrofenil-α-D-galactopiranósido
ALA
p-nitrofenil-N-acetil-β-D-glucosamina
STY
p-nitrofenil-β-D-celobiosa
URE
p-nitrofenil-N-acetil-β-D-galactosaminida
IDX
31 of 141
Abrev.
AGAL
NAG
CELL
NGAL
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