Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 115

Candida albicans ATCC 66027
Candida kefyr ATCC 66028
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus uniguttulatus ATCC 66033
POSTUPAK
Priprema panela
1. Izvadite panele koji će biti korišćeni iz skladišta. Paneli se ne smeju koristiti ako desikant nije prisutan ili ako je
slomljen ili ako je celovitost pakovanja ugrožena (otpečaćena, probušena ili pocepana).
2. Isecite kesicu i izvadite panel. Odmah izvadite panel iz kesice od folije. Sačekajte da se paneli uravnoteže na sobnoj
temperaturi pre obavljanja rehidratacije. Paneli mogu biti složeni sa čistim poklopcem posude na vrhu.
Priprema inokuluma
1. Inokulišite panel za brzu identifikaciju kvasca s organizmom koji aktivno raste. Kolonije sa primarne izolacione ploče
sa Saburovim dekstroznim agarom mogu da se koriste ako ima dovoljnog rasta. Ako je potrebno, potkulture kvasca
se izoluju na ploči sa Saburovim dekstroznim agarom i inkubiraju se dok ne dođe do dovoljnog rasta. Preporučuje se
inkubacija u trajanju od 48 sati na temperaturi od 30°C ili 48 do 72 sati na temperaturi od 25°C (sobna temperatura).
NAPOMENA: Kulture koje se inkubiraju duže od 48 sati na temperaturi od 30°C treba da se koriste samo ako je potrebna
dodatna inkubacija potrebna da bi se dobio odgovarajući rast.
2. Sterilnim štapićem za uzimanje brisa ili ezom uklonite rast sa ploče sa agarom i emulgujte u 3 ml vode za inokulum
(dejonizovana voda sterilisana u autoklavu u epruveti za uzorak od 13 x 84 mm ili 13 x 100 mm). Svaka suspenzija mora
da se uporedi i da bude jednaka MicroScan standardu zamućenosti kvasca. Upoređivanje suspenzije inokuluma testa i
standarda zamućenosti kvasca treba da se obavi korišćenjem odgovarajućeg izvora svetlost i upoređivanjem epruveta
za uzorak sa belom karticom na kojoj se nalaze kontrastne crne linije.
NAPOMENA: Osigurajte da agar ne bude uklonjen iz organizma.
3. Promešajte ili promešajte u vorteksu suspenziju dok ne postane homogena. Neki sojevi kvasca se ne rastvaraju brzo u
vodi. Ako mešanje u vorteksu ne dovede do homogene suspenzije, ostavite suspenziju da miruje 10–15 minuta i ponovo
promešajte u vorteksu. Ako u suspenziji i dalje ima skupova ćelije, sačekajte da se skupovi skupne na dnu epruvete
za uzorak i koristite supernatant za inokulaciju panela kvasca. Zamućenost supernatanta mora da odgovara MicroScan
standardu zamućenosti kvasca. Ako ne odgovara, prenesite više rasta u vodu za inokulum i ponovite gorenavedenu
proceduru.
NAPOMENA: NE pipetirajte skupove ćelija na panel kvasca.
Inokulacija panela
1. Označite panele brojem uzoraka.
2. Dodajte 50 μl suspenzije svakom bunarčiću koji sadrži supstrat i kontrolnim bunarčićima BNAC i NPC. Korišćenje
Pasterove pipete za inokulaciju se ne preporučuje.
Tabela 1-1, Supstrati
Supstrati
Hidroksiprolin-β-Naftilamid
L-Izoleucin-β-Naftilamid
L-Prolin-β-Naftilamid
L-Tirozin-β-Naftilamid
Glicin β-Naftilamid
Glicilglicin-β-Naftilamid
Glicil-L-Arginin-4-Metoksi-β-Naftilamid
Glicil-L-Prolin-4-Metoksi-β-Naftilamid
L-Arginil-L-Arginin-β-Naftilamid
L-Lizil-L-Alanin-4-Metoksi-β-Naftilamid
L-Alanin-4-Metoksi-β-Naftilamid
L-Seril-L-Tirozin-β-Naftilamid
Urea
3-Indoksil fosfat
1. Koriste se različite formulacije istih supstrata.
* American Type Culture Collection, Manassas, VA USA
C29879–AB
*
Skr. Supstrati
HPR L-Histidin-β-Naftilamid
ILE Saharoza
PRO Saharoza
TYR Trehaloza
GLY p-Nitrofenil-α-D-Glukopiranozid
GGLY p-Nitrofenil-α-D-Glukopiranozid
GLAR p-Nitrofenil-β-D-Glukopiranozid
GLPR o-Nitrofenil-β-D-galaktopiranozid
AARG p-Nitrofenil-β-D-Fukopiranozid
LYAL
p-Nitrofenil-α-D-Galaktopiranozid
ALA p-Nitrofenil-N-Acetil-β-D-Glukozamin
STY p-Nitrofenil-β-D-Celobioza
URE p-Nitrofenil-N-Acetil-β-D-Galaktosaminid
IDX
115 of 141
Skr.
HIS
SUC1
1
SUC2
TRE
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF
AGAL
NAG
CELL
NGAL