Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 109

Candida albicans ATCC 66027
Candida kefyr ATCC 66028
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus uniguttulatus ATCC 66033
PROCEDURA
Prepararea panelurilor
1. Scoateți din depozit panelurile care trebuie utilizate. Panelurile nu trebuie utilizate dacă desicantul nu este prezent sau este
rupt ori integritatea ambalajului este compromisă (neetanșat, perforat sau rupt).
2. Tăiați punga și scoateți panelul. Scoateți imediat panelul din punga de folie. Permiteți panelurilor să ajungă la temperatura
camerei înainte de rehidratare. Panourile pot fi stivuite cu o tavă de acoperire curată în partea de sus.
Prepararea inoculului
1. Inoculați panelul de identificare rapidă a levurilor cu un organism cu creștere activă. Coloniile dintr-o placă de agar Sabouraud
dextroză de izolare primară pot fi utilizate dacă există o creștere suficientă. Dacă este necesar, subcultivați izolatul de levură
pe o placă de agar Sabouraud dextroză și incubați-o până se produce o creștere suficientă. Se recomandă incubarea timp de
48 de ore la 30°C sau 48–72 de ore la 25°C (temperatura camerei).
OBSERVAȚIE: culturile incubate timp de mai mult de 48 de ore la 30°C trebuie utilizate doar dacă este necesară o incubare
suplimentară pentru a obține o creștere adecvată.
2. Folosind un tampon steril sau o ansă de inoculare, îndepărtați creșterea de pe placa de agar și emulsifiați în 3 ml de apă
de inocul (apă deionizată autoclavată într-un tub de 13 x 84 mm sau 13 x 100 mm). Fiecare suspensie trebuie comparată
cu Standardul de turbiditate pentru levuri MicroScan. Compararea cu suspensia cu inocul de test și Standardul de turbiditate
pentru levuri trebuie făcută utilizându-se o sursă de lumină adecvată și prin compararea eprubetelor cu o cartelă albă cu linii
negre contrastante.
OBSERVAȚIE: asigurați-vă că mediul agar nu este îndepărtat împreună cu organismul.
3. Amestecați sau turbionați suspensia până când este omogenă. Unele tulpini de levuri nu se dispersează ușor în apă. Dacă
turbionarea nu are ca rezultat o suspensie omogenă, lăsați suspensia să stea timp de 10–15 minute și turbionați din nou.
Dacă suspensia are în continuare aglomerări, lăsați aglomerările să se așeze pe fundul eprubetei și utilizați supernatant pentru
a inocula panelul de levuri. Turbiditatea supernatantului trebuie să corespundă cu Standardul de turbiditate pentru levuri
MicroScan. Dacă nu corespunde, transferați mai multă creștere spre apa pentru inocul și repetați procedura de mai sus.
OBSERVAȚIE: NU pipetați aglomerări de celule în panelul de levuri.
Inocularea panelurilor
1. Etichetați panelul cu numărul eșantionului.
2. Adăugați 50 μl de suspensie de levură la fiecare godeu care conține substrat și la godeurile BNAC și NPC. Nu se recomandă
utilizarea unei pipete Pasteur pentru inoculare.
Tabelul 1-1, Substraturi
Substraturi
Hidroxiprolină-β-naftilamidă
L-izoleucină-β-naftilamidă
L-prolină-β-naftilamidă
L-tirozină-β-naftilamidă
Glicină-β-naftilamidă
Glicilglicină-β-naftilamidă
Glicil-L-arginină-4-metoxi-β-naftilamidă
Glicil-L-prolină-4-metoxi-β-naftilamidă
L-arginil-L-arginină-β-naftilamidă
L-lisil-L-alanină-4-metoxi-β-naftilamidă
L-alanină-4-metoxi-β-naftilamidă
L-seril-L-tirozină-β-naftilamidă
Uree
3-indoxil fosfat
1. Sunt utilizate diferite formulări ale acelorași substraturi.
3. După ce panelul a fost inoculat cu 50 μl de inocul, loviți ușor fiecare parte a panelului pentru a asigura amestecarea cu
substratul.
* American Type Culture Collection, Manassas, VA USA
C29879–AB
*
Abrev. Substraturi
HPR L-histidină-β-naftilamidă
ILE Sucroză
PRO Sucroză
TYR
Trehaloză
GLY
p-nitrofenil-α-D-glucopiranozidă
GGLY
p-nitrofenil-α-D-glucopiranozidă
GLAR
p-nitrofenil-β-D-glucopiranozidă
GLPR o-nitrofenil-β-D-galactopriranozidă
AARG p-nitrofenil-β-D-fucopiranozidă
LYAL p-nitrofenil-α-D-galactopiranozidă
ALA p-nitrofenil-N-acetil-β-D-glucozamină
STY
p-nitrofenil-β-D-celobioză
URE
p-nitrofenil-N-acetil-β-D-galactosaminidă
IDX
109 of 141
Abrev.
HIS
SUC1
1
SUC2
TRE
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF
AGAL
NAG
CELL
NGAL