Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 38

Substratos
L-lisil-L-alanina-4-metoxi-β-naftilamida
L-alanina-4-metoxi-β-naftilamida
L-seril-L-tirosina-β-naftilamida
Ureia
3-fosfato de indoxil
1. São utilizadas formulações diferentes dos mesmos substratos.
3. Após um painel ter sido inoculado com 50 μL de inóculo, bata suavemente em cada lado do painel para ajudar a garantir
a mistura com o substrato.
NOTA: Se o painel se destinar a ser lido no WalkAway ou no autoSCAN-4, o poço LOC também deve ser inoculado.
Incubação
1. Empilhe os painéis em grupos de três a cinco, com um tabuleiro de cobertura sobre o painel superior para evitar
evaporação.
2. Incube os painéis inoculados durante 4 horas, a 35–37 °C, numa incubadora sem CO
Leitura dos painéis
1. Retire o reagente peptidase do frigorífico pelo menos 30 minutos antes de realizar a leitura dos painéis. O reagente
peptidase pode precipitar-se a 4 °C, mas voltará a dissolver-se à temperatura ambiente. Não exponha o reagente
peptidase a temperaturas elevadas para agilizar a redissolução do precipitado cristalino, uma vez que as temperaturas
elevadas causam a degradação do reagente.
2. Efetue a leitura dos painéis utilizado luz refletida por um fundo branco.
3. Após 4 horas de incubação, adicione os reagentes peptidase e hidróxido de sódio (NaOH) aos poços adequados.
A. Adicione uma gota de reagente peptidase aos poços BNAC, HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR,
AARG, LYAL, ALA, STY e HIS. Permita o desenvolvimento de cor durante 30 segundos antes de registar os
resultados. Os resultados podem ser registados dentro de 3 minutos após a adição de reagente. A presença de
QUALQUER tonalidade de rosa ou vermelho na solução ao longo de todo o poço ou em qualquer porção do poço
é interpretada como positiva. As cores devem ser comparadas ao poço BNAC. Alguns poços podem apresentar
uma cor laranja mais escura do que o poço BNAC. Estes devem ser registados como negativos. As reações são
positivas apenas se estiver presente uma cor rosa ou vermelha na solução. A cor nestes poços irá tornar-se mais
escura com o passar do tempo. Uma cor amarela negativa pode tornar-se uma cor laranja mais escura. Tal deve
ser interpretado como uma reação negativa.
NOTA: Após a adição de peptidase ao poço BNAC, este deverá apresentar-se amarelo. Caso se verifique
qualquer coloração rosa ou vermelha, o reagente peptidase não deverá ser utilizado.
B. Adicione uma gota de 0,05 N de NaOH aos poços AGL2, BDF, AGAL, NPC, NAG, CELL e NGAL. Aguarde pelo
menos 5 segundos, mas não mais do que 5 minutos, antes de registar resultados. Qualquer tonalidade de amarelo
deve ser registada como positiva. Compare os poços contendo substrato ao poço NPC.
NOTA: Estes poços podem apresentar uma coloração mais escura do que os poços NPC. Tal deverá ser
interpretado como negativo, mas uma cor amarela deve encontrar-se presente para ser considerado positivo.
4. São fornecidos dois poços de controlo para auxiliar na interpretação de reações.
A. BNAC = Controlo de β-naftilamida. Após a adição do reagente peptidase, este poço irá apresentar uma cor
amarela.
B. NPC = Controlo de nitrofenilo. Este poço deve apresentar-se incolor.
5. Consultar a secção RESULTADOS para obter ajuda sobre a interpretação bioquímica.
NOTA: O WalkAway efetua a leitura de poços que não necessitam de reagentes em primeiro lugar para prevenir
resultados alterados devido a vapores de reagentes que podem ficar aprisionados debaixo da tampa do tabuleiro,
impedindo, desta forma, a verificação manual de reações bioquímicas.
C29879–AB
Abrev. Substratos
LYAL p-nitrofenilo-α-D-galactopiranósido
ALA p-nitrofenilo-N-acetil-β-D-glucosamina
STY p-nitrofenilo-β-D-celobiose
URE
p-nitrofenilo-N-acetil-β-D-galactosaminida
IDX
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Abrev.
AGAL
NAG
CELL
NGAL
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