Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 77

Substraty
L-alanino-4-metoksy-β-naftyloamid
L-serylo-L-tyrozyno-β-naftyloamid
Mocznik
Fosforan 3-indoksylu
1. Stosowane są różne preparaty tych samych substratów.
3. Po inokulacji panelu z 50 μL inokulum, lekko postukać każdy z boków panelu, aby pomóc w wymieszaniu substratu.
UWAGA: jeżeli panel będzie odczytywany na urządzeniach WalkAway lub autoSCAN-4, należy również inokulować
studzienkę LOC.
Inkubacja
1. Ułożyć piętrowo panele w grupach od 3 do 5 z pokrywą tacy na górze panelu, aby zapobiec parowaniu.
2. Inkubować inokulowane panele przez 4 godziny w temperaturze 35–37°C w inkubatorze niezawierającym CO
Odczyt z paneli
1. Wyjąć odczynnik peptydazowy z chłodziarki na co najmniej 30 minut przed odczytaniem paneli. Odczynnik peptydazowy
może wytrącać się w temperaturze 4°C, ale ponownie rozpuści się w temperaturze pokojowej. Nie należy narażać
odczynnika peptydazowego na podwyższone temperatury w celu szybszego rozpuszczenia osadu krystalicznego,
ponieważ wysokie temperatury mogą spowodować degradację odczynnika.
2. Odczytać panele przy użyciu światła odbitego od białego tła.
3. Po 4 godzinach inkubacji do odpowiednich studzienek dodać odczynnik peptydazowy i wodorotlenek sodu (NaOH).
A. Dodać 1 kroplę odczynnika peptydazowego do studzienek BNAC, HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR,
GLPR, AARG, LYAL, ALA, STY i HIS. Umożliwić rozwój reakcji barwnej przez co najmniej 30 sekund przed
odczytaniem wyników. Wyniki muszą być zarejestrowane w ciągu 3 minut od dodania odczynnika. Obecność
JAKIEGOKOLWIEK odcienia różowego lub czerwonego w roztworze w całości lub dowolnej części studzienki jest
interpretowana jako wynik dodatni. Kolory powinny być porównywane ze studzienką BNAC. Niektóre studzienki
mogą mieć ciemniejszą barwę pomarańczową niż studzienka BNAC. Powinny być one zarejestrowane jako
ujemne. Reakcje są dodatnie tylko wtedy, jeżeli w roztworze występuje kolor różowy lub czerwony. Kolor w tych
studzienkach z czasem pociemnieje. Ujemny kolor żółty może stać się ciemniejszym kolorem pomarańczowym.
Należy to interpretować jako reakcja ujemna.
UWAGA: po dodaniu peptydazy do studzienki BNAC, powinna być ona żółta. Jeżeli występuje jakikolwiek odcień
różowego lub czerwonego, nie należy stosować odczynnika peptydazowego.
B. Dodać 1 kroplę 0,05 N NaOH do studzienek AGL2, BDF, AGAL, NPC, NAG, CELL i NGAL. Poczekać co najmniej
5 sekund, ale nie dłużej niż 5 minut przed odczytaniem wyników. Każdy odcień żółtego należy rejestrować jako
wynik dodatni. Porównać studzienki zawierające substrat ze studzienką NPC.
UWAGA: te studzienki mogą wyglądać na ciemniejsze niż studzienka NPC. Powinno być to interpretowane jako
wynik ujemny, ale do uznania za wynik dodatni musi występować kolor żółty.
4. W celu ułatwienia interpretacji reakcji, dostarczono dwie studzienki kontroli.
A. BNAC = kontrola β-naftyloamidu. Po dodaniu odczynnika peptydazowego, studzienka ta będzie miała kolor żółty.
B. NPC = kontrola nitrofenylowa. Ta studzienka powinna być bezbarwna.
5. W celu interpretacji reakcji biochemicznych należy zapoznać się z rozdziałem WYNIKI.
UWAGA: analizator WalkAway odczytuje studzienki, które nie wymagają najpierw odczynników, aby zapobiec
zaburzonym wynikom z powodu dymów odczynnika, które mogą być uwięzione pod pokrywą tacy i dlatego reakcje
biochemiczne nie mogą być weryfikowane ręcznie.
C29879–AB
Skrót Substraty
ALA p-nitrofenylo-N-acetylo-β-D-glukozoamina
STY p-nitrofenylo-β-D-celobioza
URE p-nitrofenylo-N-acetylo-β-D-galaktozamina
IDX
77 of 141
Skrót
NAG
CELL
NGAL
.
2