Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 121

Incubadora (35–37°C), sem CO
Organismos de controle de qualidade:
Candida albicans ATCC 66027
Candida kefyr ATCC 66028
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus uniguttulatus ATCC 66033
PROCEDIMENTO
Preparação de painéis
1. Retire os painéis a serem utilizados do local de armazenamento. Os painéis não deverão ser usados se não
houver dessecantes, se eles estiverem rompidos ou se a integridade da embalagem estiver comprometida
(sem vedação, furada ou rasgada).
2. Corte a bolsa para abri-la e retire o painel. Retire o painel imediatamente da embalagem de alumínio. Deixe os painéis
se equilibrarem até a temperatura ambiente antes da reidratação. Os painéis podem ser empilhados com uma bandeja
de proteção limpa na parte superior.
Preparação do inóculo
1. Inocule o Painel de identificação rápida de leveduras com um organismo em crescimento ativo. Colônias de uma
placa ágar Sabouraud Dextrose de isolamento primário podem ser usadas caso haja desenvolvimento suficiente. Se
necessário, realize a subcultura da levedura isolada em uma placa ágar Sabouraud Dextrose e incube até que ocorra
desenvolvimento suficiente. Recomenda-se incubação por 48 horas a 30°C ou de 48 a 72 horas a 25°C (temperatura
ambiente).
NOTA: culturas incubadas por mais de 48 horas a 30°C devem ser usadas apenas se for necessária incubação adicional
para obter crescimento adequado.
2. Utilizando um swab estéril ou alça de inoculação, retire o desenvolvimento da placa ágar e emulsifique em 3 mL de água
de inóculo (água deionizada esterilizada em autoclave em um tubo de 13 x 84 mm ou 13 x 100 mm). Cada suspensão
deve ser comparada e deve ser equivalente ao padrão de turbidez de levedura MicroScan. A comparação com a
suspensão de inóculo do teste e o padrão de turbidez de levedura deve ser feita usando uma fonte de luz adequada e
comparando os tubos com um cartão branco contendo linhas pretas em contraste.
NOTA: tome cuidado para garantir que nenhum meio ágar seja removido com o organismo.
3. Misture ou agite em vórtex a suspensão até que fique homogênea. Algumas cepas de levedura não se dispersam
rapidamente em água. Se agitar em vórtex não resultar em uma suspensão homogênea, deixe a suspensão descansar
por 10–15 minutos e volte a agitar em vórtex. Se a suspensão ainda tiver massas aglomeradas, deixe as massas
acumularem no fundo do tubo e use o sobrenadante para inocular o painel de levedura. A turbidez do sobrenadante
deve estar de acordo com o padrão de turbidez de levedura MicroScan. Caso isso não aconteça, transfira mais do
desenvolvimento para a água de inóculo e repita o procedimento acima.
NOTA: NÃO pipete massas aglomeradas de células no painel de levedura.
Inoculação do painel
1. Identifique o painel com o número do espécime.
2. Adicione 50 μL de suspensão de levedura a cada poço contendo substrato e nos poços de controle BNAC e NPC. O
uso de uma pipeta de Pasteur para inoculação não é recomendado.
Tabela 1-1, Substratos
Substratos
Hidroxiprolina-β-naftilamida
L-Isoleucina-β-naftilamida
L-prolina-β-naftilamida
L-Tirosina-β-naftilamida
Glicina β-naftilamida
Glicilglicina-β-naftilamida
Glicil-L-arginina-4-metoxi-β-naftilamida
Glicil-L-prolina-4-metoxi-β-naftilamida
L-Arginil-L-arginina-β-naftilamida
* American Type Culture Collection, Manassas, VA USA
C29879–AB
2
*
Abr.
Substratos
HPR
L-Histidina-β-naftilamida
ILE
Sacarose
PRO Sacarose
TYR Trealose
GLY p-Nitrofenil-α-D-glicopiranosídeo
GGLY p-Nitrofenil-α-D-glicopiranosídeo
GLAR p-Nitrofenil-β-D-glicopiranosídeo
GLPR o-Nitrofenil-β-D-galactopiranosídeo
AARG p-Nitrofenil-β-D-fucopiranosídeo
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Abr.
HIS
SUC1
1
SUC2
TRE
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF