Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 128

Incubator (35-37 °C), niet-CO
Organismen voor kwaliteitscontrole:
Candida albicans ATCC 66027
Candida kefyr ATCC 66028
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus uniguttulatus ATCC 66033
PROCEDURE
Voorbereiding van panels
1. Haal de benodigde panels uit de opslag. Panels mogen niet worden gebruikt wanneer het dehydratiemiddel afwezig
of defect is of wanneer de verpakking beschadigd is (niet dicht, geperforeerd of gescheurd).
2. Snijd de verpakking open en haal het panel eruit. Neem het panel onmiddellijk uit de folieverpakking. Laat de panels
voorafgaand aan rehydratie acclimatiseren tot kamertemperatuur. Panels mogen worden gestapeld als er een schone
afdektray bovenop wordt gelegd.
Voorbereiding van het inoculum
1. Inoculeer het panel voor snelle gistidentificatie met een actief groeiend organisme. Kolonies van een Sabouraud dextrose
agar-plaat voor primaire isolatie kunnen worden gebruikt op voorwaarde dat er voldoende groeisel aanwezig is. Plaats
indien nodig een subcultuur van het gist-isolaat op een Sabouraud dextrose agar-plaat en laat dit incuberen totdat er
zich voldoende groeisel heeft gevormd. Het worden aanbevolen om gedurende 48 uur bij 30 °C of gedurende 48 tot 72
uur bij 25 °C (kamertemperatuur) te laten incuberen.
Opmerking: culturen die gedurende meer dan 48 uur bij 30 °C hebben geïncubeerd, mogen alleen worden gebruikt
wanneer aanvullende incubatie vereist is om een bruikbare kweek te verkrijgen.
2. Verwijder met behulp van een steriel wattenstaafje of een ent-oog eventueel groeisel dat zich op de agarplaat heeft
gevormd en emulgeer in 3 mL innoculatiewater (geautoclaveerd gedeïoniseerd water in een buisje van 13 x 84 mm of 13
x 100 mm). Elke suspensie moet worden vergeleken en moet gelijk zijn aan de MicroScan-standaard voor de troebelheid
van gist. Bij het vergelijken van de test-inoculumsuspensie en de standaard voor de troebelheid van gist moet gebruik
worden gemaakt van een geschikte lichtbron, en moeten de buisjes worden vergeleken met een witte kaart met daarop
contrasterende zwarte strepen.
Opmerking: pas op dat er samen met het organisme geen agarmedium wordt verwijderd.
3. Meng de suspensie of laat deze wervelen totdat ze een homogene substantie vormt. Sommige giststammen lossen
niet gemakkelijk op in water. Indien het wervelen niet resulteert in een homogene suspensie, laat u de suspensie
10-15 minuten rusten alvorens het wervelen te herhalen. Als de suspensie nog steeds klonters bevat, laat u de klonters
bezinken op de bodem van het buisje en gebruikt u de supernatant om het gistpanel te inoculeren. De troebelheid van
de supernatant moet voldoen aan de MicroScan-standaard voor de troebelheid van gist. Is dit niet het geval, dan brengt
u meer groeisel over in het inoculatiewater en herhaalt u de bovenstaande procedure.
Opmerking: u mag klonters van cellen NIET met een pipet overhevelen naar het gistpanel.
Panel-inoculatie
1. Label het panel met het specimennummer.
2. Voeg 50 μL gistsuspensie toe aan elke well die substraat bevat, alsmede de controlewells BNAC en NPC. Het wordt niet
aangeraden om voor de inoculatie gebruik te maken van een Pasteur-pipet.
Tabel 1-1, substraten
Substraten
Hydroxyproline-β-naftylamide
L-isoleucine-β-naftylamide
L-proline-β-naftylamide
L-tyrosine-β-naftylamide
Glycine β-naftylamide
Glycylglycine-β-naftylamide
Glycyl-L-arginine-4-methoxy-β-naftylamide
Glycyl-L-proline-4-methoxy-β-naftylamide
L-arginyl-L-arginine-β-naftylamide
* American Type Culture Collection, Manassas, VA USA
C29879–AB
2
*
Afk. Substraten
HPR
L-histidine-β-naftylamide
ILE Sucrose
PRO Sucrose
TYR Trehalose
GLY p-nitrofenyl-α-D-glucopyranoside
GGLY p-nitrofenyl-α-D-glucopyranoside
GLAR p-nitrofenyl-β-D-glucopyranoside
GLPR o-nitrofenyl-β-D-galactopyranoside
AARG p-nitrofenyl-β-D-fucopyranoside
128 of 141
Afk.
HIS
SUC1
1
SUC2
TRE
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF