Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 45

MERK: Hvis panelet skal leses på WalkAway eller autoSCAN-4, må LOC-brønnen også inokuleres.
Inkubasjon
1. Stable paneler i grupper på 3 til 5 med dekkebrett over toppanelet for å unngå fordampning.
2. Inkuber de inokulerte panelene i 4 timer ved 35–37 °C i en inkubator uten CO
Lese panelene
1. Ta ut peptidasereagenset fra kjøleskapet minst 30 minutter før panelene leses av. Peptidasereagenset kan bunnfelles
ved 4 °C, men det vil oppløses på nytt ved romtemperatur. Ikke utsett peptidasereagenset for høye temperaturer for å
akselerere gjenoppløsning av det krystallinske presipitatet, da høy temperatur vil føre til at reagenset svekkes.
2. Les av panelene med reflektert lys fra en hvit bakgrunn.
3. Etter 4 timers inkubasjon, tilsett peptidase- og natriumhydroksidreagenser (NaOH) til de riktige brønnene.
A. Tilsett 1 dråpe peptidasereagens til BNAC-, HPR-, ILE-, PRO-,TYR-, GLY-, GGLY-, GLAR-, GLPR-, AARG-,
LYAL-, ALA-, STY- og HIS-brønnene. La fargen utvikles i 30 sekunder før resultatene registreres. Resultater må
registreres innen 3 minutter etter tilsetting av reagens. Nærvær av ENHVER nyanse av rosa eller rødt i løsningen i
hele brønnen eller en del av brønnen, tolkes som positiv. Fargene bør sammenlignes med BNAC-brønnen. Noen
brønner kan utvikle en mørkere oransje enn BNAC-brønnen. Disse bør registreres som negative. Reaksjoner er
positive bare hvis det er rosa eller rødt i løsningen. Fargen i disse brønnene vil bli mørkere med tiden. En negativ
gulfarge kan bli en mørkere oransje. Dette skal tolkes som en negativ reaksjon.
MERK: Når peptidase er tilsatt i BNAC-brønnen, skal den være gul. Hvis det forekommer rosa eller rødt, skal ikke
peptidasereagenset brukes.
B. Tilsett 1 dråpe 0,05N NaOH til AGL2-, BDF-, AGAL-, NPC-, NAG-, CELL- og NGAL-brønnene. Vent i minst
5 sekunder, men ikke lenger enn 5 minutter, før resultatene registreres. Enhver nyanse av gul skal registreres
som positiv. Sammenlign brønnene som inneholder substrat med NPC-brønnen.
MERK: Disse brønnene kan virke mørkere enn NPC-brønnen. Dette skal tolkes som negativ, men en gulfarge må
fremstå for å anses som positiv.
4. To kontrollbrønner leveres for å bistå i tolkning av reaksjonene.
A. BNAC = β-naftylamidkontroll. Etter tilsetting av peptidasereagens, vil denne brønnen bli gul.
B. NPC = nitrofenylkontroll. Denne brønnen skal være klar.
5. Se avsnittet RESULTATER for å få hjelp til biokjemisk tolkning.
MERK: WalkAway leser av brønner som ikke først trenger reagenser for å forhindre endrede resultater på grunn av
damp som kan være fanget under brettlokket. Derfor kan ikke biokjemiske reaksjoner verifiseres manuelt.
RESULTATER
Substrat-tolkninger
Well Reagens
HPR Tilsett 1 dråpe peptidasereagens. La fargereaksjonen
utvikles i minst 30–sekunder, men ikke lenger enn
ILE
3 min.
PRO
TYR
GLY
GGLY
GLAR
GLPR
AARG
LYAL
ALA
STY
HIS
SUC1
SUC2
TRE
AGL1 Sammenlign med NPC-kontrollbrønnen.
BGL
BGAL
URE
IDX
C29879–AB
Positiv
Enhver nyanse
av rosa, rød
til magenta i
1
løsningen
Enhver nyanse
av brun eller gul
Enhver nyanse
2
av gul
Rosa til magenta Klar/beige til gul
Enhver nyanse
av blå
45 of 141
.
2
Negativ
Gult til oransje
Lilla
Klar
Klar