Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 117

Komora Reagens
URE
IDX
AGL2 Dodajte 1 kap 0,05 N NaOH. Sačekajte najmanje 5
sekundi – ali ne duže od 5 minuta – pre beleženja
BDF
rezultata. Uporedite sa kontrolnim bunarčićem NPC.
AGAL
NAG
CELL
NGAL
1. Pozitivna boja možda neće biti prisutna u celom bunarčiću.
2. Kod nekih kvasaca može da bude prisutna ružičasta boja. To se treba smatrati pozitivnom reakcijom.
PRINCIPI REAKCIJA ZA IDENTIFIKACIJU
Supstrati aminokiseline β-naftilamida (HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR, AARG, LYAL, ALA, STY, HIS) -
Kada se izvrši hidroliza supstrata odgovarajućim enzimom (obično arilamidazom aminokiseline), oslobađa se β-naftilamin.
β-naftilamin se detektuje dodavanjem p-dimetilaminocinamaldehida (u reagensu peptidaze) koji kreira kompleks koji je
ružičaste do ljubičaste boje.
NAPOMENA: Enzim koji razdvaja aminokiselinu je β-naftilamida arilamidaza aminokiseline. Termin „aminopeptidaza" se
često koristi kao sinonim za arilamidazu ali se zapravo odnosi na enzim drugačijeg svojstva (aminopeptidaza razdvaja
aminokiselinu N-terminusa iz peptida). Arilamidaza i aminopeptidaza mogu da izvrše hidrolizu istog supstrata aminokiseline
β-naftilamida. Zato panel ne meri nužno različite i jedinstvene enzime. Jedna arilamidaza može da izvrši hidrolizu više
aminokiselina β-naftilamida.
Ugljeni hidrati (SUC1, SUC2, TRE) – Korišćenje sukroze i trehaloze dovodi do pada pH vrednosti što dalje dovodi do
promene crvene boje hlorofenola u ljubičastu do žute. Ove reakcije ugljenih hidrata su selektivne i možda neće biti u skladu
sa konvencionalnim reakcijama.
Supstrati nitrofenila (AGL1, BGL, BGAL, AGL2, BDF, AGAL, NAG, CELL, NGAL) – Ako je odgovarajući enzim prisutan,
substrat se razdvaja i oslobađa orto- ili para-nitrofenol. Ova jedinjenja su žute boje pri alkalnoj pH vrednosti. Ako do reakcije
dođe pri kiseloj pH vrednosti, NaOH se mora dodati nakon inkubacije da bi rezultati mogli da budu pročitani. Bunarčići mogu
da budu bezbojni ili svetložute boje pre dodavanja natrijum-hidroksida.
Indoksil fosfataza (IDX) – Indoksil fosfat se razdvaja fosfatazom i oslobađa se indoksil. Indoksil se kombinuje sa kiseonikom
i formira indigo plavu boja koja je nerastvorivi plavi ili plavo-sivi precipitat.
Urea (URE) – Urea se deli ureazom na amonijak i ugljen-dioksid. Amonijak (u obliku amonijum karbonata) dovodi do rasta
pH vrednosti koji se detektuje promenom crvene boje fenola u žutu do crvene.
IDENTIFIKACIJA ORGANIZAMA
Dokument „MicroScan Rapid Yeast Biotype Codebook" (MicroScan šifrarnik biotipova kvasca) se koristi za identifikaciju
nepoznatih testnih organizama. Šifrarnik je kreiran iz MicroScan baze podataka za testove koje sadrži panel za identifikaciju.
Šifrarnik kvasca je zasnovan na računarskoj analizi 27 testova na panelu za brzu identifikaciju kvasca. Rezultati testova su
konvertovani u 9-cifrene brojeve biotipova za koje šifrarnik navodi identifikaciju vrste i kumulativnu relativnu verovatnoću
identifikacije. Sve moguće identifikacije se štampaju u padajućem redosledu najveće verovatnoće do ukupnog kumulativnog
procenta od 99,9%.
Ako dođe do broja biotipa koji ne može da se pronađe u šifrarniku, prvo treba posumnjati na proceduralnu grešku. Na primer,
broj biotipa je pogrešno unet ili je reakcija pogrešno zabeležena. Ako je broj biotipa tačan, treba proveriti mogućnost mešovite
kulture i organizam treba ponovo testirati, sa posebnim naglaskom na korišćenju suspenzije ćelija odgovarajuće zamućenosti.
Ako ponovnim testiranjem postignete iste rezultate, pogledajte opciju „Biotype Lookup Service" (Usluga pretrage biotipa) na
veb-lokaciji kompanije Beckman Coulter ili se obratite lokalnom distributeru.
OGRANIČENJA POSTUPKA
1. Paneli za brzu identifikaciju kvasca su dizajnirani za identifikaciju kvasca i organizama sličnih kvascu (npr. Prototheca).
Mora se paziti na organizme sa prekomernom proizvodnjom hifa.
2. Ukoliko se za određeni broj biotipa navede više od jedne identifikacije vrste, mogu biti potrebni dodatni testovi.
Prihvaćene procedure identifikacije kvasca i organizama sličnih kvascu obuhvataju kolonijalnu morfologiju, rast na
povišenoj temperaturi, formiranje pigmenta i boje na agaru fenoloksidaze. Mikroskopska morfologija na medijumima
koji su dizajnirani za izvlačenje tipične morfologije takođe mogu da pomognu kod identifikacije ovih organizama.
Pridržavajte se odgovarajućih mikoloških referentnih procedura.
3. Do varijacija u hromogenskim rezultatima može doći zbog značajno prekomerne ili nedovoljne inokulacije sistema. Svaki
inokulum mora da se uporedi sa standardom zamućenosti kako bi se postigla odgovarajuća koncentracija inokuluma za
optimalni učinak.
C29879–AB
Pozitivno
Ružičasta do
boje magenta
Sve nijanse plave Bistra
Sve nijanse žute 2
5,6,7,8,9,10,11,12,13
117 of 141
Negativno
Bezbojna/bež do
žute
Bistra