Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 51

Υποστρώματα
β-ναφθυλαµίνη γλυκίνης
Γλυκυλογλυκίνη-β-ναφθυλαµίνη
Γλυκυλ-L-αργινίνη-4-μεθοξυ-β-ναφθυλαµίνη
Γλυκυλ-L-προλίνη-4-μεθοξυ-β-ναφθυλαµίνη
L-αργινυλο-L-αργινίνη-β-ναφθυλαµίνη
L-λυσύλ-L-αλανίνη-4-μεθοξυ-β-ναφθυλαµίνη
L-αλανίνη-4-μεθοξυ-β-ναφθυλαµίνη
L-σερυλo-L-τυροσίνη-β-ναφθυλαµίνη
Ουρία
Φωσφορικό 3-ινδοξύλιο
1. Χρησιμοποιούνται διαφορετικές συνθέσεις των ίδιων υποστρωμάτων.
3. Μετά τον ενοφθαλμισμό της πλάκας με το ενοφθάλμισμα 50 μL, χτυπήστε ελαφρώς κάθε πλευρά της πλάκας για να
διασφαλιστεί η ανάμειξη με το υπόστρωμα.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Αν η ανάλυση της πλάκας πρόκειται να γίνει στο σύστημα WalkAway ή autoSCAN-4, πρέπει να
ενοφθαλμιστεί επίσης το βοθρίο LOC.
Επώαση
1. Στοιβάξτε τις πλάκες σε ομάδες των 3 έως 5 πλακών, τοποθετώντας καλυπτρίδα στην πάνω πλάκα για την πρόληψη της
εξάτμισης.
2. Επωάστε τις ενοφθαλμισμένες πλάκες επί 4 ώρες σε θερμοκρασία 35–37 °C, σε μονάδα επώασης χωρίς CO
Ανάγνωση των πλακών
1. Αφαιρέστε το αντιδραστήριο πεπτιδάσης από το ψυγείο τουλάχιστον 30 λεπτά πριν από την ανάλυση των πλακών.
Το αντιδραστήριο πεπτιδάσης μπορεί να σχηματίσει ίζημα στους 4 °C, αλλά θα διαλυθεί εκ νέου όταν επανέλθει σε
θερμοκρασία δωματίου. Μην εκθέτετε το αντιδραστήριο πεπτιδάσης σε αυξημένες θερμοκρασίες για να επιταχύνετε την
επαναδιάλυση του κρυσταλλικού ιζήματος, καθώς οι υψηλές θερμοκρασίες επιφέρουν υποβάθμιση του αντιδραστηρίου.
2. Για την ανάγνωση των πλακών, χρησιμοποιήστε αντανακλώμενο φως από λευκό υπόβαθρο.
3. Μετά από επώαση για 4 ώρες, προσθέστε τα αντιδραστήρια πεπτιδάσης και υδροξειδίου του νατρίου (NaOH) στα
κατάλληλα βοθρία.
A. Προσθέστε 1 σταγόνα αντιδραστηρίου πεπτιδάσης στα βοθρία BNAC, HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY,
GLAR, GLPR, AARG, LYAL, ALA, STY και HIS. Αφήστε το χρώμα να αναπτυχθεί για 30 δευτερόλεπτα, προτού
καταγράψετε τα αποτελέσματα. Τα αποτελέσματα πρέπει να καταγράφονται εντός 3 λεπτών από την προσθήκη
του αντιδραστηρίου. Η παρουσία ΟΠΟΙΑΣΔΗΠΟΤΕ ροζ ή κόκκινης απόχρωσης στο διάλυμα, είτε σε ολόκληρο
το βοθρίο είτε σε οποιοδήποτε τμήμα του βοθρίου, ερμηνεύεται ως θετικό αποτέλεσμα. Τα χρώματα πρέπει να
συγκριθούν με το βοθρίο BNAC. Ορισμένα βοθρία μπορεί να έχουν πιο σκούρο πορτοκαλί χρώμα σε σχέση με
το βοθρίο BNAC. Τα βοθρία αυτά θα πρέπει να καταγράφονται ως αρνητικά. Οι αντιδράσεις είναι θετικές μόνο
εάν υπάρχει ροζ ή κόκκινη απόχρωση στο διάλυμα. Το χρώμα στα βοθρία αυτά θα σκουρύνει με την πάροδο
του χρόνου. Το αρνητικό κίτρινο χρώμα μπορεί να γίνει πιο σκούρο πορτοκαλί. Αυτό πρέπει να ερμηνευτεί ως
αρνητική αντίδραση.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μετά την προσθήκη πεπτιδάσης στο βοθρίο BNAC, θα πρέπει να ληφθεί κίτρινο χρώμα. Σε
περίπτωση παρουσίας ροζ ή κόκκινου χρώματος, το αντιδραστήριο πεπτιδάσης δεν θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί.
B. Προσθέστε 1 σταγόνα αντιδραστηρίου NaOH 0,05 N στα βοθρία AGL2, BDF, AGAL, NPC, NAG, CELL και NGAL.
Περιμένετε 5 δευτερόλεπτα τουλάχιστον, αλλά όχι πάνω από 5 λεπτά, προτού καταγράψετε τα αποτελέσματα.
Οποιαδήποτε απόχρωση του κίτρινου θα πρέπει να καταγραφεί ως θετική. Συγκρίνετε τα βοθρία που περιέχουν
υπόστρωμα με το βοθρίο NPC.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα βοθρία αυτά μπορεί να έχουν πιο σκουρόχρωμη εμφάνιση από το βοθρίο NPC. Αυτό θα πρέπει να
ερμηνευτεί ως αρνητική αντίδραση. Για να θεωρηθεί θετική η αντίδραση, απαιτείται η παρουσία κίτρινου χρώματος.
4. Παρέχονται δύο βοθρία ελέγχου για βοήθεια στην ερμηνεία των αντιδράσεων.
A. BNAC = μάρτυρας β-ναφθυλαµίνης. Μετά την προσθήκη του αντιδραστηρίου πεπτιδάσης, αυτό το βοθρίο θα
αποκτήσει κίτρινο χρώμα.
B. NPC = μάρτυρας νιτροφαινυλίου. Αυτό το βοθρίο θα πρέπει να είναι άχρωμο.
5. Ανατρέξτε στην ενότητα ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ για βοήθεια στη βιοχημική ερμηνεία.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το σύστημα WalkAway αναλύει τα βοθρία για τα οποία δεν απαιτείται πρώτα η χρήση αντιδραστηρίων, ώστε
να προληφθεί η αλλοίωση των αποτελεσμάτων λόγω πιθανών παγιδευμένων αναθυμιάσεων από τα αντιδραστήρια κάτω
από το καπάκι του δίσκου. Επομένως, οι βιοχημικές αντιδράσεις δεν είναι δυνατόν να επαληθευτούν μη αυτόματα.
C29879–AB
Συντμ. Υποστρώματα
GLY p-νιτροφαινυλο-α-D-γλυκοπυρανοζίτης
GGLY p-νιτροφαινυλο-α-D-γλυκοπυρανοζίτης
GLAR p-νιτροφαινυλο-β-D-γλυκοπυρανοζίτης
GLPR o-νιτροφαινυλο-β-D-γαλακτοπυρανοζίτης
AARG p-νιτροφαινυλο-β-D-φουκο–πυρανοζίτης
LYAL p-νιτροφαινυλο-α-D-γαλακτοπυρανοζίτης
ALA p-νιτροφαινυλο-N-ακετυλο-β-D-γλυκοζαμίνη
STY p-νιτροφαινυλο-β-D-κυτταροβιόζη
URE p-νιτροφαινυλο-N-ακετυλο-β-D-γαλακτοσαμινίδη
IDX
51 of 141
Συντμ.
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF
AGAL
NAG
CELL
NGAL
.
2