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Substrats
Urée
3-Indoxyl Phosphate
1. On utilise différentes formules des mêmes substrats.
3. Une fois la plaque inoculée avec les 50 µL d'inoculum, taper légèrement sur chaque côté de la plaque pour bien mélanger
avec le substrat.
REMARQUE : si la plaque doit être lue sur le WalkAway ou sur l'autoSCAN-4, le puits LOC doit également être inoculé.
Incubation
1. Empiler les plaques par groupes de 3 à 5 avec un couvercle sur la plaque du dessus, pour éviter l'évaporation.
2. Incuber les plaques inoculées pendant 4 heures à une température de 35–37 °C dans un incubateur sans CO
Lecture des plaques
1. Sortir le réactif Peptidase du réfrigérateur au moins 30 minutes avant la lecture des plaques. Le réactif Peptidase peut
précipiter à 4 °C, mais il se redissout à température ambiante. Ne pas exposer le réactif Peptidase à des températures
élevées pour accélérer la re-dessolution du précipité cristallin, car des températures élevées entraînent la dégradation
du réactif.
2. Lire les plaques à l'aide de la lumière réfléchissante, sur fond blanc.
3. Après 4 heures d'incubation, ajouter les réactifs de Peptidase et d'hydroxyde de sodium (NaOH) dans les puits
concernés.
A. Ajouter 1 goutte de réactif peptidase aux puits BNAC, HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR, AARG,
LYAL, ALA, STY et HIS. Laisser la couleur se développer 30 secondes avant d'enregistrer les résultats. Les
résultats doivent être enregistrés sous 3 minutes après l'ajout du réactif. La présence de TOUTE teinte de rose
ou de rouge dans la solution sur tout ou partie du puits est interprétée comme positive. Les couleurs doivent être
comparées au puits BNAC. Certains puits peuvent apparaître d'une teinte orange plus foncée que le puits BNAC.
Elles doivent être enregistrées comme négatives. Les réactions ne sont positives que si la solution présente du
rose ou du rouge. Les couleurs de ces puits deviennent plus foncées avec le temps. Une couleur jaune négative
peut devenir d'une teinte orange plus foncée. Cela doit être interprété comme une réaction négative.
REMARQUE : suite à l'ajout du Peptidase dans le puits BNAC, la couleur doit être jaune. En présence de rose
ou de rouge, le réactif Peptidase ne doit pas être utilisé.
B. Ajouter 1 goutte de 0,05N NaOH aux puits AGL2, BDF, AGAL, NPC, NAG, CELL et NGAL. Attendre au moins
5 secondes, mais pas plus de 5 minutes, pour enregistrer les résultats. Toute teinte jaune doit être enregistrée
comme un positif. Comparer les puits contenant du substrat au puits NPC.
REMARQUE : ces puits peuvent sembler plus foncés que les puits NPC. Cela doit être interprété comme négatif,
mais une couleur jaune doit être présente pour déclarer un résultat positif.
4. Deux puits de contrôle sont proposés pour aider à l'interprétation des réactions.
A. BNAC = contrôle β-naphthylamide. Après l'ajout du réactif Peptidase, ce puits doit présenter une couleur jaune.
B. NPC = contrôle nitrophényl. Ce puits doit être incolore.
5. Se référer à la section RÉSULTATS pour avoir une aide sur l'interprétation biochimique.
REMARQUE : le WalkAway lit en premier les puits qui ne nécessitent pas de réactif pour éviter l'altération des résultats,
puisque des émanations de réactif peuvent être coincées sous le couvercle du plateau ; par conséquent, il n'est pas
possible de vérifier manuellement les réactions biochimiques.
RÉSULTATS
Interprétations du substrat
Well
Réactif
HPR
Ajouter 1 goutte de réactif peptidase. Laisser la
ILE
réaction de couleur se développer pendant au moins
30 secondes, mais pas plus de 3 minutes.
PRO
TYR
GLY
GGLY
GLAR
GLPR
AARG
LYAL
ALA
STY
HIS
C29879–AB
Abr.
Substrats
URE
p-Nitrophényl-N-Acétyl-β-D-Galactosaminide
IDX
10 of 141
Positif
Négatif
Teinte de
Jaune à orange
rose, rouge ou
magenta dans la
1
solution
Abr.
NGAL
.
2
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