Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 116

3. Nakon inokulacije panela primenom 50 μl inokuluma, blago dodirnite svaku stranu panela da biste osigurali mešanje sa
supstratom.
NAPOMENA: Ako se panel očitava na sistemu WalkAway ili autoSCAN-4, i LOC bunarčić mora da bude inokulisan.
Inkubacija
1. Složite panele u grupe od 3 do 5 sa poklopcem posude postavljenim preko vrha panela da biste sprečili isparavanje.
2. Inkubirajte inokulisane panele 4 sata na 35–37°C u ne-CO
Čitanje panela
1. Izvadite reagens peptidaze iz frižidera najmanje 30 minuta pre očitavanja panela. Reagens peptidaze može da precipitira
na temperaturi od 4°C, ali će se ponovo rastvoriti na sobnoj temperaturi. Nemojte izlagati reagens peptidaze povišenim
temperaturama radi ubrzavanja ponovnog rastvaranja kristalnog precipitata zato što visoke temperature mogu da izazovu
degradaciju reagensa.
2. Očitavajte panele na reflektovanoj svetlosti sa bele pozadine.
3. Nakon 4 sata inkubacije, dodajte reagense peptidaze i natrijum-hidroksida (NaOH) u odgovarajuće bunarčiće.
A. Dodajte 1 kap reagense peptidaze u bunarčiće BNAC, HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR, AARG,
LYAL, ALA, STY i HIS. Sačekajte da se boja razvija 30 sekundi pre beleženja rezultata. Rezultati mogu da se
zabeleže do 3 minuta nakon dodavanja reagensa. Prisustvo SVAKE nijanse ružičaste ili crvene u rastvoru u
celom bunarčiću ili bilo kom delu bunarčića se tumači kao pozitivan rezultat. Boje moraju da se uporede sa BNAC
bunarčićem. Neki bunarčići mogu imati tamniju narandžastu boju u odnosu na bunarčić BNAC. Ti rezultati treba
da se zabeleže kao negativni. Reakcije su pozitivne samo ako u rastvoru ima ružičaste ili crvene. Boja u ovim
bunarčićima će potamneti vremenom. Negativna žuta boja može da postane tamnija narandžasta boja. Ova
reakcija treba da se zabeleži kao negativna.
NAPOMENA: Nakon dodatka peptidaze BNAC bunarčiću, treba da postane žut. Ako ima ružičaste ili crvene,
reagens peptidaze se ne sme koristiti.
B. Dodajte 1 kap 0,05N NaOH u bunarčiće AGL2, BDF, AGAL, NPC, NAG, CELL i NGAL. Sačekajte najmanje 5
sekundi – ali ne duže od 5 minuta – pre beleženja rezultata. Svaka nijansa žute treba da se zabeleži kao pozitivna.
Uporedite bunarčiće koji sadrže supstrat sa NPC bunarčićem.
NAPOMENA: Ovi bunarčići izgledaju tamnije od NPC bunarčića. Ovaj rezultat se treba tumačiti kao negativan, a
žuta boja mora da bude prisutna da bi se smatrao pozitivnim.
4. Dva kontrolna bunarčića se isporučuju kao pomoć u tumačenju reakcija.
A. BNAC = kontrola β-naftilamida. Ovaj bunarčić će imati žutu boju nakon dodavanja reagensa peptidaze.
B. NPC = kontrola nitrofenila. Ovaj bunarčić treba da bude bezbojan.
5. Pogledajte odeljak REZULTATI koji pomaže u biohemijskom tumačenju.
NAPOMENA: Sistem WalkAway očitava bunarčiće kod kojih nije potrebna prvobitna upotreba reagenasa zbog
sprečavanja izmenjenih rezultata zbog para reagenasa koje mogu biti zarobljene ispod poklopca posude i zato se
biohemijske reakcije ne mogu proveriti ručno.
REZULTATI
Tumačenja supstrata
Komora Reagens
HPR Dodajte 1 kap reagensa peptidaze. Sačekajte
najmanje 30 sekundi da se razvije reakcija s bojom,
ILE
ali ne duže od 3 minuta.
PRO
TYR
GLY
GGLY
GLAR
GLPR
AARG
LYAL
ALA
STY
HIS
SUC1
SUC2
TRE
AGL1 Uporedite sa kontrolnim bunarčićem NPC.
BGL
BGAL
C29879–AB
inkubatoru.
2
Pozitivno
Sve nijanse
ružičaste, crvene
do boje magente
1
u rastvoru
Sve nijanse
smeđe ili žute
Sve nijanse žute
116 of 141
Negativno
Žuta do
narandžasta
Ljubičasta
2
Bistra