Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 89

Candida albicans ATCC 66027
Candida kefyr ATCC 66028
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus uniguttulatus ATCC 66033
PROSEDÜR
Panellerin Hazırlanması
1. Kullanılacak panelleri saklama alanından çıkarın. Nem alıcı yoksa veya yırtılmışsa veya ambalaj bütünlüğünde
bozulma olmuşsa (açılmış, delinmiş ya da yırtılmış), paneller kullanılmamalıdır.
2. Poşeti keserek açın ve paneli çıkarın. Paneli hemen folyo poşetten çıkarın. Rehidrasyon öncesinde panellerin oda
sıcaklığına gelmesini bekleyin. Paneller, üzerlerine temiz bir Panel Kapağı yerleştirilerek istiflenebilir.
İnokülüm Hazırlığı
1. Hızlı Maya Tanımlama Panelini aktif olarak üreyen bir organizma ile inoküle edin. Yeterli üreme varsa, bir primer izolasyon
Sabouraud Dekstroz Agar petrisindeki koloniler kullanılabilir. Gerekirse, Sabouraud Dekstroz Agar petrisi üzerinde maya
izolatının alt kültürünü alın ve yeterli üreme gerçekleşene kadar inkübe edin. 30°C'de 48 saat veya 25°C'de 48 ila 72
saat (oda sıcaklığı) inkübasyon önerilir.
NOT: 30°C'de 48 saatten fazla inkübe edilen kültürler, yalnızca yeterli üreme elde etmek için ek inkübasyon gerekiyorsa
kullanılmalıdır.
2. Steril bir temizleme çubuğu ya da inokülasyon özesi kullanarak, agar petrisindeki üremeyi çıkarın ve 3 mL İnokülüm
Suyu (13 x 84 mm veya 13 x 100 mm tüpte otoklavlanmış deiyonize su) içinde emülsifiye edin. Her bir süspansiyon
karşılaştırılmalı ve MicroScan Maya Türbidite Standardı ile eşdeğer olmalıdır. Test inokülüm süspansiyonunun Maya
Türbidite Standardı ile karşılaştırılması, yeterli bir ışık kaynağı kullanarak ve tüpleri kontrast siyah çizgili beyaz bir kartla
karşılaştırarak yapılmalıdır.
NOT: Organizmayla birlikte hiçbir agar besiyerinin ayrılmadığından emin olun.
3. Süspansiyonu homojen olana kadar karıştırın veya vorteksleyin. Bazı maya suşları suda kolayca dağılmaz. Vorteks
işlemi homojen bir süspansiyonla sonuçlanmazsa, süspansiyonun 10-15 dakika beklemesini sağlayın ve yeniden
vorteksleyin. Süspansiyonda hala topaklar varsa, topakların tüpün dibine inmesini bekleyin ve maya panelini inoküle
etmek için üst fazı kullanın. Üst fazın türbiditesi, MicroScan Maya Türbidite Standardına uygun olmalıdır. Uygun
değilse, İnokülüm Suyuna daha fazla üreme aktarın ve yukarıdaki prosedürü tekrarlayın.
NOT: Hücre topaklarını maya paneline PİPETLEMEYİN.
Panel İnokülasyonu
1. Paneli numune numarasıyla etiketleyin.
2. Substrat içeren her kuyucuğa, BNAC ve NPC kontrol kuyucuklarına 50 μL maya süspansiyonu ekleyin. İnokülasyon için
Pasteur pipetinin kullanılması önerilmez.
Tablo 1-1, Substratlar
Substratlar
Hidroksiprolin-β-Naftilamid
L-İzolösin-β-Naftilamid
L-Prolin-β-Naftilamid
L-Tirozin-β-Naftilamid
Glisin β-Naftilamid
Glisilglisine-β-Naftilamid
Glisil-L-Arjinin-4-Metoksi-β-Naftilamid
Glisil-L-Prolin-4-Metoksi-β-Naftilamid
L-Arjinil-L-Arjinin-β-Naftilamid
L-Lisil-L-Alanin-4-Metoksi-β-Naftilamid
L-Alanin-4-Metoksi-β-Naftilamid
L-Seril-L-Tirozin-β-Naftilamid
Üre
3-İndoksil Fosfat
1. Aynı Substratların farklı formülasyonları kullanılır.
* American Type Culture Collection, Manassas, VA USA
C29879–AB
*
Kıs. Substratlar
HPR L-Histidin-β-Naftilamid
ILE Sukroz
PRO Sukroz
TYR Trehaloz
GLY p-Nitrofenil-α-D-Glukopiranozid
GGLY p-Nitrofenil-α-D-Glukopiranozid
GLAR p-Nitrofenil-β-D-Glukopiranozid
GLPR o-Nitrofenil-β-D-Galaktopiranozid
AARG p-Nitrofenil-β-D-Fukopiranozid
LYAL p-Nitrofenil-α-D-Galaktopiranozid
ALA p-Nitrofenil-N-Asetil-β-D-Glukozamin
STY p-Nitrofenil-β-D-Sellobioz
URE p-Nitrofenil-N-Asetil-β-D-Galaktozaminid
IDX
89 of 141
Kıs.
HIS
SUC1
1
SUC2
TRE
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF
AGAL
NAG
CELL
NGAL