Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 9

Organismes de contrôle de qualité :
Candida albicans ATCC 66027
Candida kefyr ATCC 66028
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus uniguttulatus ATCC 66033
PROCÉDURE
Préparation des plaques
1. Retirer les plaques à utiliser de la zone de stockage. Les plaques ne doivent pas être utilisées si le déshydratant
est absent ou rompu, ou si l'intégrité de l'emballage est compromise (non scellé, perforé ou déchiré).
2. Ouvrir le sachet et retirer la plaque. Retirer immédiatement la plaque du sachet en aluminium. Laisser les plaques
s'équilibrer à température ambiante avant la réhydratation. Les plaques peuvent être empilées en plaçant un couvercle
propre au-dessus.
Préparation de l'inoculum
1. Inoculer la plaque d'identification rapide des levures avec un organisme à croissance active. Les colonies d'une plaque
gélosée Sabouraud Dextrose à isolation primaire peuvent être utilisées si elles présentent une croissance suffisante. Si
nécessaire, faire une sous-culture de l'isolat de levure sur une plaque gélosée Sabouraud Dextrose et incuber jusqu'à ce
qu'une croissance suffisante se produise. Il est recommandé de procéder à une incubation pendant 48 heures à 30 °C
ou de 48 à 72 heures à 25 °C (température ambiante).
REMARQUE : les cultures incubées plus de 48 heures à 30 °C ne doivent être utilisées que si une incubation
supplémentaire est nécessaire à l'obtention de la croissance adéquate.
2. À l'aide d'un écouvillon stérile ou d'une anse d'inoculation, retirer la croissance de la plaque gélosée et mettre en
suspension dans 3 mL d'eau pour inoculum (eau désionisée autoclavée dans un tube de 13 x 84 mm ou 13 x 100 mm).
Chaque suspension doit être comparée et être équivalente à la turbidité standard de levure MicroScan. La comparaison
de la suspension d'inoculum test et de la turbidité standard de levure doit être réalisée à l'aide d'une source lumineuse
adaptée et en comparant les tubes à une carte blanche avec des lignes noires en contraste.
REMARQUE : veiller à ne retirer aucun milieu gélosé avec l'organisme.
3. Mélanger la suspension, ou la passer dans un vortex, jusqu'à obtention d'une consistance homogène. Certaines souches
de levure ne se dispersent pas facilement dans l'eau. Si le passage au vortex ne produit pas de suspension homogène,
laisser reposer la suspension 10–15 minutes avant de la repasser au vortex. Si la suspension présente toujours des
masses visibles, les laisser reposer au fond du tube et utiliser le surnageant pour inoculer la plaque de levures. La
turbidité du surnageant doit correspondre à la turbidité standard de levure MicroScan. Si ce n'est pas le cas, transférer
davantage de croissance dans l'eau d'inoculum et renouveler la procédure ci-dessus.
REMARQUE : NE PAS transférer à la pipette des masses de cellules dans la plaque de levures.
Inoculation de plaque
1. Appliquer une étiquette avec le numéro d'échantillon sur la plaque.
2. Ajouter 50 µL de suspension de levure à chaque puits contenant du substrat, ainsi qu'aux puits de contrôle BNAC et
NPC. Il est déconseillé d'utiliser une pipette Pasteur pour l'inoculation.
Tableau 1-1, Substrats
Substrats
Hydroxyproline-β-Naphthylamide
L-Isoleucine-β-Naphthylamide
L-Proline-β-Naphthylamide
L-Tyrosine-β-Naphthylamide
Glycine β-Naphthylamide
Glycylglycine-β-Naphthylamide
Glycyl-L-Arginine-4-Methoxy-β-Naphthylamide
Glycyl-L-Proline-4-Méthoxy-β-Naphthylamide
L-Arginyl-L-Arginine-β-Naphthylamide
L-Lysyl-L-Alanine-4-Methoxy-β-Naphthylamide
L-Alanine-4-Methoxy-β-Naphthylamide
L-Seryl-L-Tyrosine-β-Naphthylamide
* American Type Culture Collection, Manassas, VA USA
C29879–AB
*
Abr. Substrats
HPR L-Histidine-β-Naphthylamide
ILE
Saccharose
PRO Saccharose
TYR Tréhalose
GLY p-Nitrophényl-α-D-Glucopyranoside
GGLY p-Nitrophényl-α-D-Glucopyranoside
GLAR p-Nitrophényl-β-D-Glucopyranoside
GLPR o-Nitrophényl-β-D-Galactopyranoside
AARG p-Nitrophényl-β-D-Fucopyranoside
LYAL p-Nitrophényl-α-D-Galactopyranoside
ALA
p-Nitrophényl-N-Acétyl-β-D-Glucosamine
STY p-Nitrophényl-β-D-Cellobiose
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Abr.
HIS
SUC1
1
SUC2
TRE
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF
AGAL
NAG
CELL