Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 129

Substraten
L-lysyl-L-alanine-4-methoxy-β-naftylamide
L-alanine-4-methoxy-β-naftylamide
L-seryl-L-tyrosine-β-naftylamide
Ureum
3-indoxylfosfaat
1. Er worden verschillende samenstellingen van dezelfde substraten gebruikt.
3. Nadat het panel is geïnoculeerd met 50 μL inoculum, tikt u lichtjes op elke kant van het panel om voor een goede
vermenging met het substraat te zorgen.
Opmerking: wanneer het panel moet worden afgelezen op de WalkAway of autoSCAN-4, moet de LOC-well eveneens
worden geïnoculeerd.
Incubatie
1. Stapel panels in groepen van 3 tot 5 exemplaren met een afdektray op het bovenste panel om verdamping te voorkomen.
2. Incubeer de geïnoculeerde panels gedurende 4 uur bij 35-37 °C in een niet-CO
De panels aflezen
1. Neem het peptidasereagens ten minste 30 minuten vóór het aflezen van de panels uit de koelkast. Het peptidasereagens
kan bij 4 °C neerslaan, maar het zal opnieuw oplossen bij kamertemperatuur. Stel het peptidasereagens niet bloot
aan hogere temperaturen om het opnieuw oplossen van het kristallijne precipitaat te bespoedigen, aangezien hoge
temperaturen ertoe leiden dat het reagens in kwaliteit achteruitgaat.
2. Lees de panels met behulp van het licht dat wordt gereflecteerd door een witte achtergrond.
3. Na 4 uur incubatie voegt u de peptidase- en natriumhydroxide- (NaOH) reagentia toe aan de betreffende wells.
A. Voeg 1 druppel peptidasereagens toe aan de BNAC-, HPR-, ILE-, PRO-, TYR-, GLY-, GGLY-, GLAR-, GLPR-,
AARG-, LYAL-, ALA-, STY- en HIS-wells. Wacht 30 seconden tot er zich een kleur heeft gevormd alvorens de
resultaten vast te leggen. Resultaten moeten binnen 3 minuten na het toevoegen van reagens worden vastgelegd.
De manifestatie van ELKE schakering van roze of rood in de oplossing, hetzij in de volledige well of in een gedeelte
hiervan, wordt als positief geïnterpreteerd. Kleuren moeten worden vergeleken met de BNAC-well. Sommige wells
kunnen donkerder oranje zijn dan de BNAC-well. Deze moeten als negatief worden vastgelegd. Reacties mogen
alleen als positief worden beoordeeld wanneer er roze of rood te zien is in de oplossing. De kleur in deze wells
zal na verloop van tijd donkerder worden. Een 'negatieve' gele kleur kan veranderen in een donkerder oranje. Dit
moet worden opgevat als een negatieve reactie.
Opmerking: na de toevoeging van peptidase aan de BNAC-well zou deze een gele kleur moeten hebben. Is er
sprake van roze of rood, dan mag het peptidasereagens niet worden gebruikt.
B. Voeg 1 druppel 0.05N NaOH toe aan AGL2-, BDF-, AGAL-, NPC-, NAG-, CELL- en NGAL-wells. Wacht minstens
5 seconden maar niet langer dan 5 minuten alvorens de resultaten vast te leggen. Elke schakering van geel dient
als een positieve uitslag te worden geregistreerd. Vergelijk de wells die substraat bevatten met de NPC-well.
Opmerking: deze wells kunnen donkerder lijken dan de NPC-well. Dit moet als negatief worden geïnterpreteerd,
maar een gele kleur moet zichtbaar zijn om van een positief resultaat te kunnen spreken.
4. Er worden twee controlewells verstrekt om te helpen bij het interpreteren van de reacties.
A. BNAC = β-naftylamidecontrole. Na toevoeging van peptidasereagens zal deze well een gele kleur vertonen.
B. NPC = nitrofenylcontrole. Deze well zou kleurloos moeten zijn.
5. Raadpleeg het gedeelte RESULTATEN voor hulp bij de biochemische interpretatie.
Opmerking: de WalkAway leest wells die vooraf geen reagentia vereisen (ter voorkoming van gewijzigde resultaten
die optreden doordat reagensdampen opgesloten raken onder het deksel van de tray). Daardoor kunnen biochemische
reacties niet handmatig worden geverifieerd.
C29879–AB
Afk. Substraten
LYAL p-nitrofenyl-α-D-galactopyranoside
ALA p-nitrofenyl-N-acetyl-β-D-glucosamine
STY p-nitrofenyl-β-D-cellobiose
URE p-nitrofenyl-N-acetyl-β-D-galactosaminide
IDX
129 of 141
Afk.
AGAL
NAG
CELL
NGAL
-incubator.
2