Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 44

Candida albicans ATCC 66027
Candida kefyr ATCC 66028
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus uniguttulatus ATCC 66033
PROSEDYRE
Klargjøring av paneler
1. Ta panelene som skal brukes, ut fra oppbevaringsstedet. Paneler skal ikke brukes hvis tørkemiddelet ikke er til
stede eller er ødelagt eller hvis pakken er ødelagt (uforseglet, punktert eller revet i stykker).
2. Klipp opp posen, og ta ut panelet. Ta panelet straks ut av folieposen. La panelene nå romtemperatur før rehydrering.
Panelene kan stables med et rent dekselbrett øverst.
Klargjøring av inokulum
1. Inokuler hurtiggjær-identifikasjonspanelet med en aktivt voksende organisme. Kolonier fra en primær isolasjon i skål
med Sabouraud-dekstroseagar kan brukes hvis det er nok vekst til stede. Om nødvendig, subdyrk gjærisolatet i en skål
med Sabouraud-dekstroseagar og inkuber til det er nok vekst. Inkubasjon i 48 timer ved 30 °C eller 48 til 72 timer ved
25 °C (romtemperatur) anbefales.
MERK: Kulturer som inkuberes i mer enn 48 timer ved 30 °C, bør brukes bare hvis ytterligere inkubasjon trengs for å
oppnå tilstrekkelig vekst.
2. Bruk en steril vattpinne eller inokulerende løkke til å fjerne vekst fra agarskålen og emulger i 3 mL inokuleringsvann
(autoklavert, avionisert vann i et 13 x 84 mm- eller 13 x 100 mm prøverør). Hver suspensjon må sammenlignes og tilsvare
MicroScan gjærturbiditetsstandarden. Sammenligningen med testinokulumsuspensjonen og gjærturbiditetsstandarden
bør skje med egnet lyskilde og ved å sammenligne prøverørene med et hvitt kort med svarte kontrastlinjer.
MERK: Pass på å sikre at ikke noe agarmedium fjernes med organismen.
3. Bland eller vorteks suspensjonen til den er homogen.
vorteksprosedyren ikke resulterer i en homogen suspensjon, la suspensjonen hvile i 10–15 minutter før en ny vorteks
utføres. Hvis det fortsatt er klumper i suspensjonen, la dem falle til bunns i prøverøret og bruk supernatant for å
inokulere gjærpanelet. Turbiditeten til supernatanten må samsvare med MicroScan-gjærturbiditetsstandarden. Hvis
ikke, overfør mer vekst til inokulumvannet og gjenta ovennevnte prosedyre.
MERK: IKKE pipetter klumper av celler i gjærpanelet.
Panelinokulering
1. Merk panelet med prøvenummer.
2. Tilsett 50 μL gjærsuspensjon til hver brønn som inneholder substrat, pluss kontrollbrønnene BNAC og NPC. Bruk av en
Pasteur-pipette for inokulering anbefales ikke.
Tabell 1-1, Substrater
Substrater
Hydroxyprolin-β-naftylamid
L-isleucin-β-naftylamid
L-prolin-β-naftylamid
L-tyrosin-β-naftylamid
Glysin-β-naftylamid
Glysylglysin-β-naftylamid
Glycyl-L-arginin-4-metoksy-β-naftylamid
Glycyl-L-prolin-4-metoksy-β-naftylamid
L-arginyl-L-arginin-β-naftylamid
L-lysyl-L-alanin-4-metoksy-β-naftylamid
L-alanin-4-metoksy-β-naftylamid
L-seryl-L-tyrosin-β-naftylamid
Urea
3-indoksyl-fosfat
1. Forskjellige formuleringer brukes av de samme substratene.
3. Når panelet er inokulert med 50 µL inokulum, slå lett på hver side av panelet for å bidra til å sikre blanding med substratet.
* American Type Culture Collection, Manassas, VA USA
C29879–AB
*
Fork. Substrater
HPR
L-histidin-β-naftylamid
ILE Sukrose
PRO Sukrose
TYR Trehalose
GLY p-nitrofenyl-α-D-glukopyranosid
GGLY p-nitrofenyl-α-D-glukopyranosid
GLAR p-nitrofenyl-β-D-glukopyranosid
GLPR o-nitrofenyl-β-D-galaktopyranosid
AARG p-nitrofenyl-β-D-fukopyranosid
LYAL p-nitrofenyl-α-D-galaktopyranosid
ALA p-nitrofenyl-N-acetyl-β-D-glukosamin
STY p-nitrofenyl-β-D-cellobiose
URE p-nitrofenyl-N-acetyl-β-D-galaktosaminid
IDX
Noen gjærstammer løses ikke lett opp i vann.
44 of 141
Fork.
HIS
SUC1
1
SUC2
TRE
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF
AGAL
NAG
CELL
NGAL
Hvis