Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 16

50 μL-Pipettierhilfe mit Spitzen
Inkubator (35–37 °C), CO
Qualitätskontrollorganismen:
Candida albicans ATCC 66027
Candida kefyr ATCC 66028
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus uniguttulatus ATCC 66033
VERFAHREN
Vorbereitung der Panels
1. Die zu verwendenden Panels aus dem Lager entnehmen. Die Panels sollten nicht verwendet werden, wenn das
Trockenmittel fehlt oder zerbrochen ist oder wenn die Unversehrtheit der Verpackung nicht mehr gegeben ist
(geöffnet, eingerissen oder beschädigt).
2. Den Beutel aufschneiden und das Panel entnehmen. Das Panel unverzüglich aus dem Folienbeutel entnehmen. Die
Panels vor der Rehydrierung Raumtemperatur annehmen lassen. Die Panels können mit sauberen Abdeckplatten
aufeinandergestapelt werden.
Inokulum-Vorbereitung
1. Das Rapid-Hefe-Identifikationspanel mit einem aktiv wachsenden Organismus beimpfen. Kolonien von einer primär
isolierten Sabouraud-Dextrose-Agarplatte können gegebenenfalls verwendet werden, wenn ausreichend Wachstum
vorhanden ist. Falls notwendig, eine Subkultur des Hefeisolats auf einer Sabouraud-Dextrose-Agarplatte erstellen
und inkubieren bis ausreichend Wachstum eingetreten ist. Eine Inkubation bei 30 °C für 48 Stunden oder bei 25 °C
(Raumtemperatur) für 48 bis 72 Stunden wird empfohlen.
HINWEIS: Kulturen die länger als 48 Stunden bei 30 °C inkubiert wurden, sollten nur verwendet werden, wenn zusätzliche
Inkubation erforderlich ist, um angemessenes Wachstum zu erreichen.
2. Das Wachstum mit einem sterilen Wattestäbchen oder einer Impföse von der Agarplatte entfernen und in 3 mL
Inokulumwasser (autoklaviertes deionisiertes Wasser in einem 13-x-84-mm- oder 13-x-100-mm-Röhrchen) emulgieren.
Jede Suspension muss mit dem MicroScan-Hefe-Trübungsstandard verglichen werden und äquivalent zu dem sein. Der
Vergleich mit der Test-Inokulumsuspension und dem Hefe-Trübungsstandard sollte mit einer adäquaten Lichtquelle und
durch Vergleichen der Röhrchen mit einer weißen Karte mit kontrastierenden schwarzen Linien durchgeführt werden.
HINWEIS: Darauf achten, sicherzustellen, dass kein Agarmedium mit dem Organismus entfernt wird.
3. Die Suspension mit oder ohne Vortex mischen, bis sie homogen ist. Einige Hefestämme verteilen sich nicht ohne
Weiteres in Wasser. Wenn das Mischen mittels Vortex nicht zu einer homogenen Suspension führt, die Suspension
für 10–15 Minuten stehen lassen und dann erneut mittels Vortex mischen. Wenn die Suspension immer noch Klumpen
aufweist, zulassen, dass die Klumpen sich auf dem Boden des Röhrchens absetzen, und den Überstand verwenden, um
das Hefepanel zu beimpfen. Die Trübung des Überstands muss dem MicroScan-Hefe-Trübungsstandard entsprechen.
Wenn das nicht der Fall ist, mehr Wachstum zu dem Inokulumwasser übertragen und das obige Verfahren wiederholen.
HINWEIS: Zellklumpen NICHT in das Hefepanel pipettieren.
Inokulation des Panels
1. Das Panel mit der Probennummer etikettieren.
2. Zu jeder Substrat enthaltenden Vertiefung sowie den Kontrollvertiefungen, BNAC und NPC, 50 μL Hefesuspension
hinzufügen. Der Gebrauch einer Pasteur-Pipette für die Inokulation wird nicht empfohlen.
Tabelle 1-1, Substrate
Substrate
Hydroxyprolin-β-Naphthylamid
L-Isoleucin-β-Naphthylamid
L-Prolin-β-Naphthylamid
L-Tyrosin-β-Naphthylamid
Glycin-β-Naphthylamid
Glycylglycin-β-Naphthylamid
Glycyl-L-Arginin-4-Methoxy-β-Naphthylamid
Glycyl-L-Prolin-4-Methoxy-β-Naphthylamid
* American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA
C29879–AB
-frei
2
*
Abk.
HPR
ILE
PRO
TYR
GLY
GGLY
GLAR
GLPR
Substrate
L-Histidin-β-Naphthylamid
Saccharose
Saccharose
Trehalose
p-Nitrophenyl-α-D-Glucopyranosid
p-Nitrophenyl-α-D-Glucopyranosid
p-Nitrophenyl-β-D-Glucopyranosid
o-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranosid
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Abk.
HIS
SUC1
1
SUC2
TRE
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL