Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 37

Incubadora (35–37 °C), sem CO
Organismos de controlo de qualidade:
Candida albicans ATCC 66027
Candida kefyr ATCC 66028
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus uniguttulatus ATCC 66033
PROCEDIMENTO
Preparação de painéis
1. Retire os painéis a utilizar do local de armazenamento. Os painéis não devem ser utilizados se não houver
dessecante, ou se o mesmo estiver quebrado, nem se a integridade da embalagem estiver comprometida (não
selada, perfurada ou rasgada).
2. Corte a bolsa para a abrir e retire o painel. Retire imediatamente o painel da bolsa de alumínio. Permita que os painéis
atinjam a temperatura ambiente antes da reidratação. Os painéis podem ser empilhados com um tabuleiro de cobertura
limpo colocado por cima dos mesmos.
Preparação do inóculo
1. Inocule o Painel de identificação rápida de leveduras com um organismo em crescimento ativo. As colónias de
um isolamento primário em placas de ágar sabouraud dextrose podem ser utilizadas se apresentarem crescimento
suficiente. Se necessário, efetue uma subcultura do isolado de levedura numa placa de ágar sabouraud dextrose e
incube até que ocorra um crescimento suficiente. Recomenda-se a incubação durante 48 horas a 30 °C ou durante
48 a 72 horas a 25 °C (temperatura ambiente).
NOTA: As culturas incubadas durante um período de tempo superior a 48 horas a 30 °C apenas devem ser utilizadas
se for necessária uma incubação adicional para atingir o crescimento adequado.
2. Utilizando uma cotonete esterilizada ou uma ansa de inoculação, remova o crescimento da placa de ágar e emulsione
em 3 mL de água para inóculo (água desionizada autoclavada num tubo de amostra de 13 x 84 mm ou 13 x 100 mm).
Cada suspensão deve ser comparada e equivalente ao Padrão de turvação para leveduras MicroScan. A comparação
com a suspensão para inóculo de teste e o Padrão de turvação para leveduras deve ser realizado utilizado uma fonte
de luz adequada e comparando os tubos de amostra com um cartão branco com linhas de contraste pretas.
NOTA: Tenha o cuidado de se certificar de que nenhum meio de ágar é removido com o organismo.
3. Misture ou agite em vórtex a suspensão até que esta fique homogénea. Algumas estripes de levedura não dispersam
facilmente na água. Se não for alcançada uma suspensão homogénea com agitação em vórtex, deixe a suspensão
repousar durante 10–15 minutos e volte a agitar em vórtex. Se a suspensão ainda apresentar agregados, permita que
estes se instalem no fundo do tubo de amostra e utilize o sobrenadante para inocular o painel de leveduras. A turvação
do sobrenadante deve corresponder à do Padrão de turvação para leveduras MicroScan. Se não corresponder, transfira
mais crescimento à água para inóculo e repita o procedimento acima.
NOTA: NÃO pipete agregados de células no painel de leveduras.
Inoculação do painel
1. Etiquete o painel com o número da amostra.
2. Adicione 50 μL de suspensão de levedura a cada poço contendo substrato e aos poços de controlo BNAC e NPC. Não
é recomendável a utilização de uma pipeta Pasteur para inoculação.
Tabela 1-1, Substratos
Substratos
Hidroxiprolina-β-naftilamida
L-isoleucina-β-naftilamida
L-prolina-β-naftilamida
L-tirosina-β-naftilamida
Glicina β-naftilamida
Glicilglicina-β-naftilamida
Glicil-L-arginina-4-metoxi-β-naftilamida
Glicil-L-prolina-4-metoxi-β-naftilamida
L-arginil-L-arginina-β-naftilamida
* American Type Culture Collection, Manassas, VA USA
C29879–AB
2
*
Abrev.
Substratos
HPR
L-histidina-β-naftilamida
ILE
Sacarose
PRO Sacarose
TYR Trealose
GLY p-nitrofenilo-α-D-glucopiranósido
GGLY p-nitrofenilo-α-D-glucopiranósido
GLAR p-nitrofenilo-β-D-glucopiranósido
GLPR o-nitrofenil-β-D-galactopiranósido
AARG p-nitrofenilo-β-D-fucopiranoside
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Abrev.
HIS
SUC1
1
SUC2
TRE
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF