Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 111

Reactiv
Godeu
AGL2
Adăugați 1 picătură de NaOH 0,05 N. Așteptați cel puțin
BDF
5 secunde, dar nu mai mult de 5 minute înainte de
AGAL
înregistrarea rezultatului. Comparați cu godeul de control
NAG
NPC.
CELL
NGAL
1. Este posibil ca o culoare pozitivă să nu fie prezentă în întregul godeu.
2. O culoare roz poate fi prezentă cu unele levuri. Aceasta trebuie considerată o reacție pozitivă.
PRINCIPIILE REACȚIILOR DE IDENTIFICARE
Substraturi de β-naftilamidă aminoacidică (HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR, AARG, LYAL, ALA, STY, HIS) – Când substratul
este hidrolizat de enzima corespunzătoare (de obicei, o arilamidază aminoacidică), se eliberează β-naftilamină. β-naftilamina se
detectează prin adăugarea de p-dimetilaminocinamaldehidă (în reactivul Peptidază), care creează un complex de culoare de la roz la
violet.
OBSERVAȚIE: enzima care scindează o β-naftilamidă aminoacidică este o arilamidază a aminoacidului. Termenul „aminopeptidază"
este utilizat frecvent ca sinonim pentru arilamidază, însă reprezintă, de fapt, o enzimă cu specificitate diferită (o aminopeptidază
scindează aminoacidul N-terminal dintr-o peptidă). O arilamidază și o aminopeptidază pot hidroliza același substrat de β-naftilamidă
aminoacidică. Astfel, panelul nu măsoară neapărat enzime diferite și unice. O singură arilamidază poate hidroliza mai multe
β-naftilamide aminoacidice.
Carbohidrați (SUC1, SUC2, TRE) – Utilizarea de sucroză și trehaloză are ca rezultat o scădere a pH-ului, care determină schimbarea
roșului de clorofenol de la violet la galben. Aceste reacții de carbohidrați sunt selective și este posibil să nu se conformeze reacțiilor
convenționale.
Substraturi de nitrofenil (AGL1, BGL, BGAL, AGL2, BDF, AGAL, NAG, CELL, NGAL) – Dacă enzima corespunzătoare este prezentă,
substratul este scindat, eliberând orto- sau para-nitrofenol. La pH alcalin, compușii sunt galbeni. Dacă reacția se produce la un pH
acid, trebuie adăugat NaOH după incubare înainte ca rezultatele să poată fi citite. Godeurile pot fi fie incolore sau de culoare galben
pal înainte de adăugarea hidroxidului de sodiu.
Indoxil fosfatază (IDX) – Indoxil fosfatul este scindat de o fosfatază pentru eliberarea indoxilului. Indoxilul se combină cu oxigenul
pentru a forma albastru indigo, care este un precipitat insolubil albastru sau albastru-gri.
Uree (URE) – Ureea este scindată de urează pentru a forma amoniac și dioxid de carbon. Amoniacul (sub formă de carbonat de
amoniu) determină o creștere a pH-ului, care este detectată prin schimbarea roșului de fenol de la galben la roșu.
IDENTIFICAREA ORGANISMELOR
Lista rapidă de coduri de biotipuri de levuri MicroScan se utilizează pentru identificarea organismelor de test necunoscute. Această
listă de coduri a fost generată din baza de date MicroScan pentru testele incluse pe panelul de identificare. Lista de coduri pentru
levuri se bazează pe o analiză computerizată a celor 27 de teste din panelul de identificare rapidă a levurilor. Rezultatele testelor
sunt transformate într-un număr de biotip din 9 cifre pentru care lista de coduri conține o identificare a speciei și o probabilitate
relativă cumulativă a identificării. Toate identificările posibile sunt imprimate în ordinea descrescătoare a celei mai mari probabilități
a unui total cumulativ de 99,9%.
Dacă apare un număr de biotip care nu poate fi găsit în lista de coduri, trebuie suspectată mai întâi o eroare procedurală; de
exemplu, numărul de biotip a fost adăugat incorect sau o reacție a fost înregistrată eronat. Dacă numărul de biotip este corect,
trebuie verificată posibilitatea unei culturi amestecate și organismul trebuie retestat, cu accent special pe utilizarea unei suspensii
de celule suficient de turbide. Dacă retestarea produce aceleași rezultate, consultați Serviciul de căutare a biotipurilor din site-ul
Beckman Coulter sau consultați distribuitorul local.
LIMITARE A PROCEDURII
1. Panelurile de identificare rapidă a levurilor sunt destinate identificării levurilor și a organismelor asemănătoarelor levurilor (de
exemplu, Prototheca). Trebuie acordată atenție organismelor cu producție excesivă de hifal.
2. Dacă se listează mai multe identificări de specii pentru un anumit număr de biotip, pot fi necesare teste suplimentare.
Procedurile de identificare acceptate a levurilor și a organismelor asemănătoare levurilor includ morfologia colonială, creșterea
la temperatură ridicată, formarea pigmentului și colorarea pe agar de fenoloxidază. Morfologia microscopică pe medii concepute
pentru determinarea morfologiei tipice poate ajuta, de asemenea, la identificarea acestor organisme. Consultați procedurile
de referință micologice corespunzătoare.
3. Pot apărea variații ale rezultatelor cromogenice din cauza suprainoculării sau subinoculării excesive a sistemului. Fiecare inocul
trebuie comparat cu standardul de turbiditate pentru a se realiza concentrația corectă de inocul pentru performanțe optime.
CONTROLUL CALITĂȚII
Acceptabilitatea substraturilor de identificare trebuie verificată prin testarea unor organisme cu reacții cunoscute. Rezultatele pentru
fiecare reacție pentru organisme de control MicroScan recomandate se găsesc în Diagrama de control al calității din acest manual.
C29879–AB
Pozitivă
Orice nuanță de
galben
5,6,7,8,9,10,11,12,13
111 of 141
Negativ
Limpede
2