Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 103

Субстрати
Глицилглицин-β-нафтиламид
Глицил- L-аргинин-4-метокси-β-нафтиламид
Глицил-L-пролин-4-метокси-β-нафтиламид
L-аргинил-L-аргинин-β-нафтиламид
L-лизил-L-аланин-4-метокси-β-нафтиламид
L-аланин-4-метокси-β-нафтиламид
L-серил-L-тирозин-β-нафтиламид
Урея
3-индоксил фосфат
1. Използват се различни рецептури на едни и същи субстрати.
3. След инокулиране на панела с 50 μL инокулум, леко потупайте всяка страна на панела, за да се осигури смесване
със субстрата.
ЗАБЕЛЕЖКА: Ако панелът ще се отчита на WalkAway или autoSCAN-4, ямката LOC също трябва да бъде
инокулирана.
Инкубация
1. Подредете панелите в групи от 3 до 5 с поставена покривна поставка на най-горния панел, за да се предотврати
изпаряване.
2. Инкубирайте инокулираните панели в продължение на 4 часа при температура 35–37°C в инкубатор, в който не
се използва CO .
2
Отчитане на панелите
1. Извадете реактива за пептидаза от хладилника поне 30 минути преди отчитане на панелите. Реактивът за
пептидаза може да се утаи при 4°C, но ще се разтвори отново при стайна температура. Не излагайте реактив
за пептидаза на повишени температури, за да ускорите повторното разтваряне на кристалната утайка, тъй като
високите температури ще доведат до разрушаване на реактива.
2. Отчетете панелите, като използвате отразена светлина от бял фон.
3. След 4 часа инкубиране добавете реактиви за пептидаза и натриев хидроксид (NaOH) към подходящите ямки.
A. Добавете 1 капка реактив за пептидаза към ямките BNAC, HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR,
AARG, LYAL, ALA, STY и HIS. Изчакайте 30 секунди да се развие цветът, преди да регистрирате резултатите.
Резултатите трябва да се регистрират в рамките на 3 минути след добавянето на реактива. Наличието
на КАКЪВТО И ДА Е нюанс на розово или червено в разтвора в цялата ямка или в част от ямката се
интерпретира като положителен резултат. Цветовете трябва да се сравняват с ямката BNAC. Някои ямки
може да проявяват по-тъмно оранжев цвят от този на ямката BNAC. Те трябва да бъдат регистрирани като
отрицателни. Реакциите са положителни само ако има наличие на розово или червено в разтвора. Цветът
в тези ямки ще потъмнява с времето. Отрицателен жълт цвят може да стане по-тъмно оранжев цвят. Това
трябва да се интерпретира като отрицателна реакция.
ЗАБЕЛЕЖКА: След добавяне на пептидаза към ямката BNAC, тя трябва да стане жълта. Ако има розов
или червен цвят, реактивът за пептидаза не трябва да се използва.
B. Добавете 1 капка 0,05 N NaOH към ямки AGL2, BDF, AGAL, NPC, NAG, CELL и NGAL. Изчакайте поне 5
секунди, но не повече от 5 минути, преди да регистрирате резултатите. Всеки нюанс на жълтото трябва да
се регистрира като положителен резултат. Сравнете ямките, съдържащи субстрат, с ямката NPC.
ЗАБЕЛЕЖКА: Тези ямки може да се проявят в по-тъмен цвят от този на ямката NPC. Това трябва да
се интерпретира като отрицателен резултат, но при наличие на жълт цвят трябва да се разглежда като
положителен резултат.
4. Контролните ямки са предвидени за подпомагане на интерпретирането на реакциите.
A. BNAC = β-нафтиламид контрол. След добавяне на реактив за пептидаза тази ямка ще бъде в жълт цвят.
B. NPC = нитрофенилова контрола. Тази ямка трябва да бъде безцветна.
5. Вижте раздела РЕЗУЛТАТИ за помощ при интерпретиране на биохимичните тестове.
ЗАБЕЛЕЖКА: WalkAway отчита първо ямки, които не изискват реактиви, за да се предотвратят променени
резултати поради парите на реактива, които може да се уловят под капака на поставката, поради това
биохимичните реакции не могат да бъдат верифицирани ръчно.
C29879–AB
Съкр. Субстрати
GGLY p-нитрофенил-α-D-глюкопиранозид
GLAR p-нитрофенил-β-D-глюкопиранозид
GLPR o-нитрофенил-β-D-галактопиранозид
AARG p-нитрофенил-β-D-фукопиранозид
LYAL p-нитрофенил-α-D-галактопиранозид
ALA p-нитрофенил-N-ацетил-β-D-глюкозамин
STY p-нитрофенил-β-D-целобиоза
URE
p-нитрофенил-N-ацетил-β-D-галактозаминид
IDX
103 of 141
Съкр.
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF
AGAL
NAG
CELL
NGAL