Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 65

Well Reagentas
AGL1 Palyginkite su NPC kontroliniu šulinėliu.
BGL
BGAL
URE
IDX
AGL2 Įlašinkite 1 lašą 0,05 N NaOH. Prieš užrašydami
rezultatą palaukite bent 5 sekundes, tačiau ne ilgiau
BDF
nei 5 minutes. Palyginkite su NPC kontroliniu šulinėliu.
AGAL
NAG
CELL
NGAL
1. Teigiamos reakcijos spalva gali būti ne visame šulinėlyje.
2. Naudojant kai kuriuos mielių grybelius gali atsirasti rožinė spalva. Tai reikia laikyti teigiama reakcija.
INDENTIFIKAVIMO REAKCIJŲ PRINCIPAS
Aminorūgšties β-naftilamido substratai (HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR, AARG, LYAL, ALA, STY,
HIS) – kai substratas hidrolizuojamas atitinkamu fermentu (paprastai aminorūgšties arilamidaze), išsiskiria β-naftilaminas.
β-naftilaminas aptinkamas pridėjus p-dimetilamincinamaldehido (esančio peptidazės reagente), kuris sukuria nuo rožinės iki
purpurinės kintančios spalvos kompleksą.
PASTABA: aminorūgšties β-naftilamidą skaidantis fermentas yra aminorūgšties arilamidazė. Terminas „aminopeptidazė"
dažnai vartojamas kaip arilamidazės sinonimas, tačiau iš tikrųjų reiškia skirtingo specifiškumo fermentą (aminopeptidazė
atskiria N-galinę aminorūgštį nuo peptido). Arilamidazė ir aminopeptidazė gali hidrolizuoti tą patį aminorūgšties β-naftilamido
substratą. Todėl plokštelė nebūtinai nustato skirtingus ir unikalius fermentus. Viena arilamidazė gali hidrolizuoti keletą
aminorūgšties β-naftilamidų.
Angliavandeniai (SUC1, SUC2, TRE) –kai naudojama sacharozė ir trehalozė, sumažėja pH, todėl chlorfenolio raudonojo
spalva iš purpurinės pasikeičia į geltoną. Šios angliavandenių reakcijos yra selektyvios ir gali neatitikti įprastų reakcijų.
Nitrofenilo susbstratai (AGL1, BGL, BGAL, AGL2, BDF, AGAL, NAG, CELL, NGAL) – jei yra atitinkamas fermentas,
substratas suskaidomas ir išsiskiria orto- arba para-nitrofenolis. Esant šarminei pH šie junginiai yra geltoni. Jei reakcija vyksta
esant rūgštinei pH, kad galėtumėte nuskaityti rezultatus, po inkubacijos reikia pridėti NaOH. Prieš pridedant natrio hidroksido
šulinėliai gali būti bespalviai arba blankiai geltonos spalvos.
Indoksilo fosfatazė (IDX) – indoksilo fosfatazė suskaido indoksilo fosfatą ir išsiskiria indoksilas. Indoksilas jungiasi su
deguonimi, sudarydamas indigo mėlį, kuris yra netirpios mėlynos arba mėlynai-pilkos nuosėdos.
Šlapalas (URE) – ureazė skaido šlapalą, sudarydama amoniaką ir anglies dioksidą. Dėl amoniako (amonio karbonato
pavidalu) padidėja pH, kuri aptinkama fenolio raudonojo spalvai pakitus iš geltonos į raudoną.
MIKROORGANIZMŲ IDENTIFIKAVIMAS
„MicroScan" greitųjų mielių grybelių biotipų kodų knygelė naudojama nežinomiems tiriamiesiems mikroorganizmams
identifikuoti. Ši identifikavimo plokštelėje esančių tyrimų kodų knygelė sudaryta iš „MicroScan" duomenų bazės. Mielių
grybelių kodų knygelė pagrįsta kompiuterine 27 tyrimų, atliktų greitojoje mielių grybelių identifikavimo plokštelėje, analize.
Tyrimo rezultatai paverčiami 9 skaitmenų biotipo numeriu, pagal kurį kodų knygelėje nurodomos identifikuotos rūšys ir
identifikacijos suminė santykinė tikimybė. Visos galimos identifikacijos spausdinamos mažėjančia tvarka nuo didžiausios
tikimybės iki suminės bendros 99,9 % tikimybės.
Jei gaunamas biotipo numeris, kurio nėra kodų knygelėje, pirmiausia reikia ieškoti procedūros klaidos, pvz., neteisingai pridėto
biotipo numerio ar klaidingai užrašytos reakcijos. Jei biotipo numeris teisingas, reikia patikrinti mišrios kultūros tikimybę ir iš
naujo ištirti mikroorganizmą užtikrinant, kad būtų naudojama pakankamai drumsta ląstelių suspensija. Jei pakartotinai atlikus
tyrimą gaunami tie patys rezultatai, kreipkitės į biotipų paieškos tarnybą „Beckman Coulter" interneto svetainėje arba į vietinį
platintoją.
METODO APRIBOJIMAS
1. Greitosios mielių grybelių identifikavimo plokštelės skirtos mielių grybeliams ir mielių grybelių tipo mikroorganizmams
(pvz., Prototheca) identifikuoti. Reikia būti atsargiems su mikroorganizmais, itin gausiai gaminančiais hifus.
2. Jei pateikta daugiau nei viena tam tikro biotipo numerio rūšies identifikacija, gali reikėti papildomų tyrimų. Priimtinomis
mielių grybelių ir mielių grybelių tipo mikroorganizmų identifikavimo procedūromis taip pat yra kolonijų morfologija,
augimas aukštesnėje temperatūroje, pigmentų susidarymas ir spalva fenoloksidazės agare. Mikroskopinė morfologija
terpėje, skirtoje išgauti įprastinę morfologiją, taip pat gali padėti identifikuoti šiuos mikroorganizmus. Žr. atitinkamas
mikologijos referentines procedūras.
C29879–AB
5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13
65 of 141
Teigiamas Neigiamas
Bet koks Skaidrus
geltonos spalvos
2
atspalvis
Nuo rožinės iki Nuo
rausvos skaidrios /smėlio
spalvos iki
geltonos
Bet koks mėlynos Skaidrus
spalvos atspalvis
Bet koks Skaidrus
geltonos spalvos
atspalvis 2