Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 63

Candida albicans ATCC 66027
Candida kefyr ATCC 66028
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus uniguttulatus ATCC 66033
PROCEDŪRA
Plokštelių paruošimas
1. Išimkite naudojamas plokšteles iš saugyklos. Plokštelių naudoti negalima, jei nėra džioviklio arba jis sulūžęs, arba
jei pažeistas pakuotės vientisumas (pakuotė atidaryta, pradurta ar įplėšta).
2. Perpjaukite maišelį ir išimkite plokštelę. Tuoj pat išimkite plokštelę iš folijos maišelio. Prieš rehidratuodami leiskite
plokštelių temperatūrai susilyginti su kambario temperatūra. Plokštelės gali būti sudėtos viena ant kitos, su švariu
dengiamuoju dėklu ant viršaus.
Inokulianto paruošimas
1. Inokuliuokite greitąją mielių grybelių identifikavimo plokštelę aktyviai augančiu mikroorganizmu. Jei yra pakankamas
augimas, galima naudoti kolonijas iš pirminio išskyrimo Sabouraud dekstrozės agaro lėkštelėje. Jei reikia, pasėkite
išskirtą mielių grybelių padermę į Sabouraud dekstrozės agaro lėkštelę ir inkubuokite tol, kol vyks pakankamas augimas.
Rekomenduojama inkubuoti 48 valandas 30 °C temperatūroje arba 48–72 valandas 25 °C (kambario) temperatūroje.
PASTABA: kultūras, kurios ilgiau nei 48 valandas inkubuotos 30 °C temperatūroje, galima naudoti tik tuo atveju, jei
papildomas inkubavimas buvo reikalingas pakankamam augimui pasiekti.
2. Steriliu tamponu ar inokuliavimo kilpele paimkite pasėlį iš agaro lėkštelės ir padarykite emulsiją 3 ml inokulianto vandens
(autoklavu apdorotas dejonizuotas vanduo 13 × 84 mm arba 13 × 100 mm mėgintuvėlyje). Kiekvieną suspensiją būtina
palyginti ir ji turi atitikti „MicroScan" mielių drumstumo standartą. Tiriamą inokulianto suspensiją ir mielių drumstumo
standartą reikia palyginti naudojant tinkamą šviesos šaltinį ir lyginant mėgintuvėlius su balta kortele, kurioje nubrėžtos
kontrastuojančios juodos linijos.
PASTABA: pasistenkite užtikrinti, kad su mikroorganizmu nebūtų paimta agaro terpės.
3. Įprastai ar sūkurinėje maišyklėje maišykite suspensiją tol, kol ji taps vienalytė. Kai kurios mielių grybelių padermės
sunkiai disperguojamos vandenyje.
suspensiją pastovėti 10–15 minučių, tada vėl maišykite sūkurine maišykle. Jei suspensijoje vis tiek yra gumulų,
palaukite, kol gumulai nusės į mėgintuvėlio dugną, ir inokuliuokite mielių grybelių plokštelę paviršiniu suspensijos
sluoksniu. Paviršinio sluoksnio drumstumas turi atitikti „MicroScan" mielių drumstumo standartą. Jei drumstumas
neatitinka, perkelkite daugiau pasėlio į inokulianto vandenį ir pakartokite aprašytą procedūrą.
PASTABA: NEBANDYKITE pipete perkelti ląstelių gumulų į mielių grybelių plokštelę.
Plokštelių inokuliavimas
1. Ant plokštelės užrašykite mėginio numerį.
2. Į kiekvieną šulinėlį su substratu ir į kontrolinius šulinėlius BNAC ir NPC įlašinkite po 50 µl mielių grybelių suspensijos.
Inokuliuojant nerekomenduojama naudoti Pasteuro pipetės.
1-1 lentelė. Substratai
Substratai
Hidroksiprolin-β-naftilamidas
L-izoleucin-β-naftilamidas
L-prolin-β-naftilamidas
L-tirozin-β-naftilamidas
Glicino β-naftilamidas
Glicilglicin-β-naftilamidas
Glicil-L-arginin-4-metoksi-β-naftilamidas
Glicil-L-prolin-4-metoksi-β-naftilamidas
L-arginil-L-arginin-β-naftilamidas
L-lizil-L-alanin-4-metoksi-β-naftilamidas
L-alanin-4-metoksi-β-naftilamidas
L-seril-L-tirozin-β-naftilamidas
Šlapalas
3-indoksilfosfatas
1. Naudojamos skirtingos tų pačių substratų formuluotės.
* Amerikos kultūrų tipų kolekcija, Manasas, VA USA
C29879–AB
*
Jei maišant sūkurinėje maišyklėje negaunama vienalytė suspensija, palikite
Santr. Substratai
HPR L-histidin-β-naftilamidas
ILE Sacharozė
PRO Sacharozė
TYR Trehalozė
GLY p-nitrofenil-α-D-gliukopiranozidas
GGLY p-nitrofenil-α-D-gliukopiranozidas
GLAR p-nitrofenil-β-D-gliukopiranozidas
GLPR o-nitrofenil-β-D-galaktopiranozidas
AARG p-nitrofenil-β-D-fukopiranozidas
LYAL p-nitrofenil-α-D-galaktopiranozidas
ALA p-nitrofenil-N-acetil-β-D-gliukozaminas
STY p-nitrofenil-β-D-celobiozė
URE p-nitrofenil-N-acetil-β-D-galaktozaminidas
IDX
63 of 141
Santr.
HIS
SUC1
1
SUC2
TRE
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF
AGAL
NAG
CELL
NGAL