Publicité
Les langues disponibles
Les langues disponibles
3. Panel, 50 μL inokülüm ile inoküle edildikten sonra, substrat ile karışmasını sağlamak için panelin her iki tarafına hafifçe
vurun.
NOT: Panel WalkAway veya autoSCAN-4'te okunacaksa LOC kuyucuğu da inoküle edilmelidir.
İnkübasyon
1. Buharlaşmayı engellemek için üst panelin üzerine bir panel kapağı koyarak panelleri 3-5'li gruplar halinde istifleyin.
2. İnoküle edilmiş panelleri 4 saat boyunca 35-37°C'de CO
Panellerin Okunması
1. Peptidaz reaktifini panelleri okumadan en az 30 dakika önce buzdolabından çıkarın. Peptidaz reaktifi 4°C'de çökelebilir,
ancak oda sıcaklığında yeniden çözülür. Kristal çökeltinin yeniden çözülmesini hızlandırmak için Peptidaz reaktifini
yüksek sıcaklıklara maruz bırakmayın; yüksek sıcaklıklar reaktifin bozulmasına neden olur.
2. Beyaz bir arka plandan yansıyan ışığı kullanarak panelleri okuyun.
3. 4 saat inkübasyondan sonra, uygun kuyucuklara Peptidaz ve Sodyum Hidroksit (NaOH) reaktiflerini ekleyin.
A. BNAC, HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR, AARG, LYAL, ALA, STY ve HIS kuyucuklarına 1
damla Peptidaz reaktifi ilave edin. Sonuçları kaydetmeden önce 30 saniye boyunca rengin gelişmesini bekleyin.
Sonuçlar, reaktif ilavesinden sonra 3 dakika içinde kaydedilmelidir. Kuyucuğun tamamında veya herhangi bir
kısmında çözelti içinde HERHANGİ BİR pembe ya da kırmızı renk tonu olması, pozitif olarak yorumlanır. Renkler
BNAC kuyucuğu ile karşılaştırılmalıdır. Bazı kuyucuklar BNAC kuyucuğundan daha koyu turuncu görünebilir.
Bunlar negatif olarak kaydedilmelidir. Reaksiyonlar sadece çözelti içinde pembe veya kırmızı olması durumunda
pozitiftir. Bu kuyucuklardaki renk zamanla koyulaşır. Negatif olan sarı renk daha koyu turuncu olabilir. Bu, negatif
reaksiyon olarak yorumlanmalıdır.
NOT: BNAC kuyucuğuna Peptidaz eklendikten sonra, kuyucuk sarı olmalıdır. Herhangi bir pembe veya kırmızı
varsa, Peptidaz reaktifi kullanılmamalıdır.
B. AGL2, BDF, AGAL, NPC, NAG, CELL ve NGAL kuyucuklarına 1 damla 0,05 N NaOH ekleyin. Sonuçları
kaydetmeden önce, en az 5 saniye, en fazla 5 dakika bekleyin. Herhangi bir sarı tonu pozitif olarak kaydedilmelidir.
Substrat içeren kuyucukları NPC kuyucuğu ile karşılaştırın.
NOT: Bu kuyucuklar NPC kuyucuğundan daha koyu görünebilir. Bu negatif olarak yorumlanmalıdır, ancak pozitif
olarak değerlendirilmesi için sarı renk bulunmalıdır.
4. Reaksiyonların yorumlanmasına yardımcı olmak için iki kontrol kuyucuğu temin edilmiştir.
A. BNAC=β-naftilamid kontrolü. Peptidaz reaktifi eklendikten sonra, bu kuyucuk sarı renkte olacaktır.
B. NPC=nitrofenil kontrolü. Bu kuyucuk renksiz olmalıdır.
5. Biyokimyasal yorum konusunda yardım için SONUÇLAR bölümüne bakın.
NOT: WalkAway, tepsi kapağı altında sıkışabilecek reaktif dumanları nedeniyle sonuçların değişmesini önlemek için önce
reaktif gerektirmeyen kuyucukları okur, bu nedenle biyokimyasal reaksiyonlar manuel olarak doğrulanamaz.
SONUÇLAR
Substrat Yorumlamaları
Well
Reaktif
HPR
1 damla Peptidaz reaktifi ilave edin. En az 30 saniye
ve en fazla 3 dakika boyunca renk reaksiyonunun
ILE
gelişmesini bekleyin.
PRO
TYR
GLY
GGLY
GLAR
GLPR
AARG
LYAL
ALA
STY
HIS
SUC1
SUC2
TRE
AGL1
NPC kontrol kuyucuğuyla karşılaştırın.
BGL
BGAL
URE
C29879–AB
'siz bir inkübatörde inkübe edin.
2
Pozitif
Çözelti içinde
herhangi bir
Pembe, Kırmızı
ila Macenta tonu
1
Herhangi bir
Kahverengi veya
Sarı tonu
Herhangi bir sarı
2
tonu
Pembe ila
Macenta
90 of 141
Negatif
Sarı ila Turuncu
Mor
Berrak
Berrak/Bej ila
Sarı
Publicité
