Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 46

Well Reagens
AGL2 Tilsett 1 dråpe 0,05 N NaOH. Vent i minst 5 sekunder,
men ikke lenger enn 5 minutter, før resultatet
BDF
registreres. Sammenlign med NPC-kontrollbrønnen.
AGAL
NAG
CELL
NGAL
1. En positiv farge trenger ikke være tilstede gjennom hele brønnen.
2. En rosafarge kan forekomme med enkelte gjærtyper. Dette bør anses som en positiv reaksjon.
PRINSIPPER FOR IDENTIFISERINGSREAKSJONER
Aminosyre β-naftylamidsubstrater (HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR, AARG, LYAL, ALA, STY, HIS) –
Når substratet hydrolyseres av det riktige enzymet (vanligvis en aminosyre-aryladmidase), frigis β-naftylamin. β-naftylamin
påvises ved tilsetting av p-dimetylaminocinnamaldehyd (i peptidasereagenset) som skaper et kompleks som er rosa til lilla i
farge.
MERK: Enzymet som spalter en aminosyre β-naftylamid, er en aminosyrearylamidase. Uttrykket «aminopeptidase» brukes
hyppig som synonym for arylamidase, men representerer faktisk et enzym med forskjellig spesifisitet (en aminopeptidase
spalter N-terminal-aminosyren fra et peptid). En arylamidase og en aminopeptidase kan hydrolysere det samme aminosyre
β-naftylamidsubstratet. Dermed måler ikke panelet nødvendigvis forskjellige og unike enzymer. Én enkelt arylamidase kan
hydrolysere flere aminosyre-β-naftylamider.
Karbohydrater (SUC1, SUC2, TRE) – Anvendelsen av sukrose og trehalose resulterer i en pH-reduksjon som fører til at
klorofenolrødt endres fra lilla til gul. Disse karbohydratreaksjonene er selektive og vil kanskje ikke samsvare med tradisjonelle
reaksjoner.
Nitrofenyl-substrater (AGL1, BGL, BGAL, AGL2, BDF, AGAL, NAG, CELL, NGAL) – Hvis riktig enzym forekommer, spaltes
substratet slik at orto- eller para-nitrofenol frigis. Ved alkalisk pH, blir disse forbindelsene gule. Hvis reaksjonen forekommer
ved sur pH, må NaOH tilsettes etter inkubasjon før resultatene kan leses av. Brønnene kan enten være fargeløse eller svakt
gule før natriumhydroksid tilsettes.
Indoksyl-fosfatase (IDX) – Indoksylfosfat spaltes av en fosfatase for å frigi indoksyl. Indoksylet kombineres med oksygen for
å danne indigoblå, som er et uløselig blått eller blå-grått presipitat.
Urea (URE) – Urea splittes ved urease for å danne ammoniakk og karbondioksid.
ammoniakk-karbonat) fører til en stigning i pH, som detekteres av at fenolrød går fra gul til rød.
IDENTIFISERING AV ORGANISME
MicroScan-hurtiggjær-biotypekodebok brukes for å identifisere ukjente testorganismer. Denne kodeboken er generert fra
MicroScans database for testene som er inkludert på identifikasjonspanelet. Gjærkodeboken er basert på en dataanalyse av
de 27 testene på hurtiggjær-identifikasjonspanelet. Testresultatene forvandles til et 9-sifret biotypenummer som kodeboken
oppgir en artsidentifikasjon for og en kumulativ relativ sannsynlighet for identifikasjon. Alle mulige identifikasjoner skrives ut i
synkende rekkefølge av høyest sannsynlighet til en kumulativ sum på 99,9 %.
Dersom et bioptypenummer forekommer som ikke står i kodeboken, bør man først mistenke en prosedyrefeil, f.eks. at
biotypenummeret er lagt til feil eller en reaksjon er feilaktig registrert. Hvis biotypenummeret er riktig, bør muligheten for
blandet kultur sjekkes og organismen bør testes på nytt, med spesiell vekt på bruk av en tilstrekkelig turbid cellesuspensjon.
Hvis en ny test gir de samme resultatene, se Biotypesøketjeneste på Beckman Coulter nettside eller ta kontakt med din
lokale distributør.
PROSEDYREBEGRENSNINGER
1. Hurtiggjær-identifikasjonspaneler er designet for identifikasjon av gjær- og gjærlignende organismer (f.eks. Prototheca).
Varsomhet må utvises med organismer med for stor produksjon av sopp.
2. Hvis mer enn én artsidentifisering er oppgitt for et bestemt biotypenummer, kan flere tester være nødvendige.
Aksepterte identifikasjonsprosedyrer av gjær og gjærlignende organismer inkluderer kolonial morfologi, vekst
ved forhøyet temperatur, pigmentdannelse og farge på fenoloksidaseagar.
designet for å fremkalle typisk morfologi, kan også bistå i identifikasjon av disse organismene.
mykologireferanseprosedyrer.
3. Variasjon i kromogene resultater kan forekomme som følge av for mye over- eller underinokulering av systemet. Hvert
inokulum må sammenlignes med turbiditetsstandarden for å oppnå riktig konsentrasjon av inokulum for optimal ytelse.
KVALITETSKONTROLL
Identifikasjonssubstratenes akseptabilitet skal sjekkes ved å teste organismer med kjente reaksjoner. Resultatene for hver
reaksjon for anbefalte MicroScan-kontrollorganismer står i kvalitetskontrolltabellen i denne håndboken.
C29879–AB
5,6,7,8,9,10,11,12,13
46 of 141
Positiv Negativ
Enhver nyanse Klar
av gul 2
Mikroskopisk morfologi på medier
Ammoniakken (i form av
Se egnede