Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 96

Субстраты
Глицин β-нафтиламид
Глицилглицин-β-нафтиламид
Глицил-L-аргинин-4-метокси-β-нафтиламид
Глицил-L-пролин-4-метокси-β-нафтиламид
L-аргинил-L-аргинин-β-нафтиламид
L-лизил-L-аланин-4-метокси-β-нафтиламид
L-аланил-4-метокси-β-нафтиламид
L-серил-L-тирозин-β-нафтиламид
Мочевина
3-индоксилфосфат
1. Используются разные формы выпуска одних и тех же субстратов.
3. После инокуляции каждой лунки панели 50 мкл инокулята слегка постучите пальцами по каждой стороне панели
для обеспечения перемешивания инокулята с субстратом.
ПРИМЕЧАНИЕ. Если панель считывается с помощью приборов WalkAway или autoSCAN-4, необходимо также
инокулировать лунку LOC.
Инкубация
1. Сложите панели стопками по 3–5 штук в каждой, а верхнюю панель накройте крышкой для предотвращения
испарения.
2. Инкубируйте инокулированные панели в течение 4 часов при температуре 35–37°C в инкубаторе без CO
Считывание данных с планшетов
1. Извлеките из холодильника пептидазный реагент не менее чем за 30 минут до считывания панелей. При
температуре 4°C в пептидазном реагенте может выпасть осадок, однако при комнатной температуре он снова
растворяется. Не допускается нагревание пептидазного реагента для ускорения растворения кристаллического
осадка, поскольку повышенная температура вызывает разложение реагента.
2. Выполните считывание панелей в отраженном свете на белом фоне.
3. После инкубации в течение 4 часов добавьте пептидазный реагент и раствор гидроксида натрия (NaOH) в
соответствующие лунки.
A. Добавьте по 1 капле пептидазного реагента в лунки BNAC, HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR,
GLPR, AARG, LYAL, ALA, STY и HIS. Подождите не менее 30 секунд до развития цветной реакции,
после чего зарегистрируйте результаты. Результаты должны регистрироваться в течение 3 минут после
добавления реагента. Наличие во всей лунке или в части лунки ЛЮБОГО оттенка розового или красного
цвета интерпретируется как положительный результат. Цвет следует сравнивать с цветом лунки BNAC.
Некоторые лунки могут иметь более интенсивную оранжевую окраску по сравнению с лункой BNAC. Для
таких лунок необходимо зарегистрировать отрицательный результат. Реакции являются положительными
лишь в том случае, если раствор окрашен в розовый или красный цвет. Со временем цвет в этих лунках
становится более темным. Отрицательная желтая окраска может перейти в более темный оранжевый
цвет. Это необходимо интерпретировать как отрицательную реакцию.
ПРИМЕЧАНИЕ. После добавления пептидазы в лунку BNAC лунка должна быть желтой. Не используйте
пептидазный реагент при появлении розовой или красной окраски.
B. В лунки AGL2, BDF, AGAL, NPC, NAG, CELL и NGAL добавьте по 1 капле 0,05 N раствора NaOH.
Подождите по крайней мере 5 секунд (но не более 5 минут), после чего зарегистрируйте результаты.
Любой оттенок желтого цвета следует регистрировать как положительную реакцию. Сравните лунки,
содержащие субстрат, с лункой NPC.
ПРИМЕЧАНИЕ. Лунки с субстратом могут казаться темнее, чем лунка NPC. Это следует интерпретировать
как отрицательную реакцию. Чтобы считать реакцию положительной, в лунках должно присутствовать
желтое окрашивание.
4. Для облегчения интерпретации результатов в планшет включены две контрольные лунки.
A. BNAC = контроль с β-нафтиламидом. После добавления пептидазного реагента цвет этой лунки должен
стать желтым.
B. NPC — контроль с нитрофениловым реагентом. Эта лунка должна быть бесцветной.
5. Информация по интерпретации результатов биохимических реакций приводится в разделе «РЕЗУЛЬТАТЫ».
ПРИМЕЧАНИЕ. Система WalkAway в первую очередь считывает лунки, в которые не требуется добавление
реагентов, для предотвращения искажения результатов вследствие скопления паров реагентов, удерживаемых
под крышкой панели. Таким образом, биохимические реакции не могут подтверждаться вручную.
C29879–AB
Сокр. Субстраты
GLY п-нитрофенил-α-D-глюкопиранозид
GGLY п-нитрофенил-α-D-глюкопиранозид
GLAR п-нитрофенил-β-D-глюкопиранозид
GLPR o-Нитрофенил-β-D-галактопиранозид
AARG п-нитрофенил-β-D-фукопиранозид
LYAL п-нитрофенил-α-D-галактопиранозид
ALA п-нитрофенил-N-ацетил-β-D-глюкозамин
STY п-нитрофенил-β-D-целлобиоза
URE п-нитрофенил-N-ацетил-β-D-галактозамин
IDX
96 of 141
Сокр.
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF
AGAL
NAG
CELL
NGAL
.
2