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Pipeta de 50 μL con puntas
Incubador (35-37 °C), sin CO
Microorganismos para control de calidad:
Candida albicans ATCC 66027
Candida kefyr ATCC 66028
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus uniguttulatus ATCC 66033
PROCEDIMIENTO
Preparación de paneles
1. Extraiga los paneles que se vayan a utilizar del lugar en el que se conservan. Los paneles no deben utilizarse si no
tienen desecador, si está roto, o si la integridad de la envoltura está afectada (abierta, perforada o desgarrada).
2. Corte la bolsa para abrirla y retire el panel. Extraiga inmediatamente el panel de la bolsa de aluminio. Deje que los
paneles se atemperen a temperatura ambiente antes de rehidratarlos. Los paneles se pueden apilar con un panel
cubridor encima.
Preparación del inóculo
1. Inocule el panel rápido de identificación de levaduras con un microorganismo de crecimiento activo. Pueden usarse
colonias de una placa de agar Sabouraud dextrosa de aislamiento primario si hay presente un crecimiento suficiente.
Si es necesario, realice un subcultivo de aislado de levadura en una placa de agar Sabouraud dextrosa e incube hasta
que se produzca un crecimiento suficiente. Se recomienda realizar la incubación durante 48 horas a 30 °C o entre 48 y
72 horas a 25 °C (temperatura ambiente).
NOTA: Los cultivos incubados durante más de 48 horas a 30 °C se deben usar solamente si se requiere incubación
adicional para obtener un crecimiento adecuado.
2. Con un hisopo estéril o un asa de inoculación, retire el crecimiento de la placa de agar y emulsione en 3 mL de agua para
inóculo (agua desionizada esterilizada en autoclave en un tubo de 13 × 84 mm o 13 × 100 mm). Se debe comparar cada
suspensión y debe ser equivalente al estándar de turbidez de levaduras MicroScan. La comparación de la suspensión
de inóculo de prueba y el estándar de turbidez de levaduras se debe realizar empleando una fuente de luz adecuada y
mediante una comparación de los tubos con una tarjeta blanca con líneas negras de contraste.
NOTA: Asegúrese de que no se retira medio agar con el microorganismo.
3. Mezcle o agite en vórtex la suspensión hasta que sea homogénea. Algunas cepas de levadura no se dispersan con
facilidad en agua. Si después de agitar en vórtex no queda una suspensión homogénea, deje reposar la suspensión
durante 10-15 minutos y vuelva a agitarla. Si la suspensión todavía tiene acumulaciones, permita que se asienten en el
fondo del tubo y use el sobrenadante para inocular el panel de levaduras. La turbidez del sobrenadante debe coincidir
con el estándar de turbidez de levaduras MicroScan. Si no lo hace, transfiera más crecimiento al agua para inóculo y
repita el procedimiento anterior.
NOTA: NO pipetee acumulaciones de células en el panel de levaduras.
Inoculación del panel
1. Etiquete el panel con el número de muestra.
2. Añada 50 μL de suspensión de levadura a cada pocillo que contiene sustrato, más los pocillos de control de BNAC y
NPC. No se recomienda el uso de una pipeta Pasteur para la inoculación.
Tabla 1-1, Sustratos
Sustratos
Hidroxiprolina-β-naftilamida
L-isoleucina-β-naftilamida
L-prolina-β-naftilamida
L-tirosina-β-naftilamida
Glicina β-naftilamida
Glicilglicina-β-naftilamida
Glicil-L-arginina-4-metoxi-β-naftilamida
Glicil-L-prolina-4-metoxi-β-naftilamida
L-arginil-L-arginina-β-naftilamida
*
American Type Culture Collection, Manassas, VA, EE. UU.
C29879–AB
2
*
Abrev.
Sustratos
HPR
L-histidina-β-naftilamida
ILE
Sacarosa
PRO
Sacarosa
TYR
Trehalosa
GLY
p-nitrofenil-α-D-glucopiranosida
GGLY
p-nitrofenil-α-D-glucopiranosida
GLAR
p-nitrofenil-β-D-glucopiranósido
GLPR
o-nitrofenil-β-D-galactopiranosida
AARG
p-nitrofenil-β-D-fucopiranosida
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Abrev.
HIS
SUC1
1
SUC2
TRE
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF
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