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4.6 Transférer 20 µl d'échantillon dans un tube de LS sauf indication contraire mentionnée dans les tableaux de
protocole 2, 3 et 4 (p. ex. l'utilisation de 10 µl de produits laitiers crus).
5. Répéter l'étape 4.2 jusqu'à ce que chaque échantillon individuel ait été ajouté au tube de LS correspondant dans la
barrette.
6. Reprendre les étapes 4.1 à 4.6 au besoin, en fonction du nombre d'échantillons à tester.
7. Une fois tous les échantillons transférés, transférer 20 µl de NC (milieu d'enrichissement stérile, p. ex. Bouillon demi-
Fraser) dans un tube de LS. Ne pas utiliser d'eau comme NC.
8. Vérifier que la température du Support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire 3M est de 100 ±1 °C.
9. Placer le portoir non couvert de tubes de LS dans le Support de bloc chauffant pour système de détection moléculaire
3M et chauffer pendant 15 ± 1 minute. Lors du chauffage, la solution LS passe du rose (froide) au jaune (chaude).
Les échantillons qui n'ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l'étape de lyse peuvent
être considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l'Instrument de détection
moléculaire 3M.
10. Retirer le portoir non couvert de tubes de LS du bloc chauffant et le laisser refroidir dans le Support de bloc refroidissant
pour système de détection moléculaire 3M entre 5 et 10 minutes. Utilisé à température ambiante sans le Plateau de
bloc refroidissant pour système de détection moléculaire, le Support de bloc refroidissant pour système de détection
moléculaire 3M doit être posé directement sur le plan de travail du laboratoire. Une fois froide, la solution de lyse
retrouve une couleur rose.
11. Retirer le couvercle des tubes de LS du Support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M.
Amplification
1. Il est nécessaire d'utiliser un tube de réactif pour chaque échantillon et pour le NC.
1.1 Les barrettes de tubes de réactif peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes souhaité.
Sélectionner le nombre de tubes de réactif individuels ou de barrettes de 8 tubes nécessaire.
1.2 Placer les tubes de réactif sur un support vide.
1.3 Éviter de toucher les pastilles réactives se trouvant au fond des tubes.
2. Sélectionner 1 tube de Contrôle de réactif (RC) et le placer dans le support.
3. Afin d'éviter toute contamination croisée, ouvrir une barrette de tubes de réactif à la fois et utiliser un nouvel embout de
pipette pour chaque étape de transfert.
4. Transférer les lysats dans les tubes de réactif et le tube de RC comme indiqué ci-dessous :
Transférer tout d'abord chaque lysat dans les tubes de réactif individuels, puis transférer le NC. Hydrater en dernier le
tube de CR.
5. Ouvrir les barrettes de tubes de réactif une à une à l'aide de l'Outil d'ouverture/fermeture pour système de détection
moléculaire 3M™ – Réactif. Jeter les bouchons.
5.1 Transférer 20 µl de lysat d'échantillon dans le tube de LS (éviter toute précipitation) vers le tube de réactif
correspondant. Incliner la pipette pour ne pas agiter les pastilles. Mélanger en effectuant 5 cycles d'aspiration/
refoulement avec la pipette.
00:15:00
99-101ºC
00:05:00
10
FR
(Français)
20 µl
20-25ºC
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