Qiagen therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit Mode D'emploi page 28

Remarque : Le mélange réactionnel RT et les échantillons (contrôle positif, NTC ou
échantillons à tester) doivent être mélangés soigneusement pour assurer l'efficacité de la
réaction RT.
Tableau 4. Échantillon ajouté à chaque mélange réactionnel de transcription inverse.
Nom de l'échantillon
Contrôle sans matrice
Échantillon de test
Contrôle positif (Positive Control, PC)
16. Agiter au vortex tous les tubes par impulsions de 3 secondes pour garantir que tous les
réactifs et matrices RT sont mélangés.
17. Vérifier que toutes les bulles ont été éliminées et que les réactifs et matrices RT sont au
fond du tube.
18. Laisser les tubes dans le bloc de chargement à température ambiante pendant
15 minutes.
19. Incuber les échantillons dans un bloc chauffant, bain-marie ou thermocycleur à 42 °C
pendant 30 minutes pour la transcription inverse de l'ARN.
20. Incuber les échantillons dans un bloc chauffant, bain-marie ou thermocycleur à 95 °C
pendant 3 minutes pour inactiver la transcriptase inverse.
21. Stocker les échantillons d'ADNc jusqu'à leur utilisation comme matrice pour l'étape de
PCR. Pour un stockage de courte durée, les échantillons peuvent être conservés entre 2 et
8 °C pendant un maximum de 5 jours, ou entre –30 et –15 °C pendant un maximum de
30 jours.
Mode d'emploi (manuel) du therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit 08/2019
Type d'échantillon
Eau pour NTC
Échantillon
Contrôle positif (Positive Control, PC)
Diluant du PC
Volume
15 µl
15 µl
5 µl
10 µl
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