Table des Matières
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Procédure
1. Mettre en place un bloc de chargement d'une capacité de 96 tubes de PCR de 0,2 ml et
un bloc de refroidissement pouvant maintenir au moins 12 tubes de 2 ml entre 0 et 8 °C
pendant un minimum de 60 minutes avant la préparation de la réaction.
2. Décongeler le tampon RT 1, le tampon RT 2, la transcriptase inverse, le mélange
d'amorces RT et l'eau pour NTC fournis avec le therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit à
température ambiante entre 30 minutes et 3 heures avant le début de la préparation de
la réaction de transcription inverse.
3. Décongeler les échantillons à tester, le contrôle positif et le diluant du contrôle positif
à 0–8 °C entre 30 minutes et 3 heures avant le début de la préparation de la réaction
de transcription inverse.
4. Examiner soigneusement tous les réactifs RT pour vérifier qu'ils sont complètement
décongelés et dissous dans la solution. Dissoudre tous précipités présents dans le
tampon RT 2 en agitant au vortex. Si nécessaire, incuber brièvement le tampon à 37 °C
jusqu'à dissolution des précipités.
5. Agiter au vortex tous les réactifs RT en effectuant 3 impulsions de 3 secondes afin de
garantir que tous les réactifs sont bien mélangés.
6. Centrifuger brièvement tous les réactifs RT pour récupérer les gouttelettes sur les parois et
les couvercles des tubes.
7. Préparer suffisamment de mélange principal de transcription inverse pour le nombre
d'échantillons à tester et pour les deux contrôles, le contrôle positif (Positive Control, PC)
et le contrôle sans matrice (No Template Control, NTC). Le mélange principal de
transcription inverse doit être préparé à une température comprise entre 0 et 8 °C,
conformément au Tableau 3.
Remarque : Préparer assez de mélange principal pour 2 réactions supplémentaires
(n + 2), si vous utilisez un nombre d'échantillons ≤ 16, et pour 4 réactions
supplémentaires (n + 4), si vous utilisez un nombre d'échantillons > 16, afin de disposer
de suffisamment de volume pour la préparation de la transcription inverse.
Mode d'emploi (manuel) du therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit 08/2019
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