Principe De La Procédure - Qiagen therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit Mode D'emploi

Principe de la procédure
Le therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit est basée sur la détection par amplification sélective de six
altérations de FGFR3 dans l'ARN extrait de prélèvements de CU FFPE à l'aide du Rotor-Gene Q
MDx 5plex HRM system. Grâce à la technologie spécifique à l'allèle, il est possible de détecter
les altérations cibles des FGFR avec précision et avec une grande reproductibilité à l'aide
d'ensembles d'amorces et de sondes sens et antisens spécifiques ; seule une correspondance
parfaite des amorces et des sondes avec l'ADNc cible permet l'élongation et l'amplification dans
la PCR. Les rapports des résultats sont créés de façon entièrement automatisée. Si les contrôles du
cycle et les résultats des échantillons sont valides et si la cible du dosage est suffisamment
amplifiée en restant sous le seuil du nombre de cycles prédéterminé, le rapport indique la ou les
altérations de FGFR détectées dans chaque échantillon.
Purification de l'ARN
Les échantillons fixés au formol et inclus en paraffine (Formalin Fixed, Paraffin Embedded,
FFPE) sont le type d'échantillons de tumeurs solides le plus répandu. Bien qu'ils soient stables
et faciles à transporter et stocker, le processus de fixation et d'inclusion détériore les acides
nucléiques et les contamine avec des résidus d'hydrocarbures cireux. Des techniques de
purification spécifiques doivent donc être employées pour obtenir des échantillons adaptés à
l'analyse diagnostique in vitro. Le RNeasy DSP FFPE Kit a été conçu spécialement pour
répondre aux difficultés rencontrées dans la purification de l'ARN à partir de prélèvements
FFPE et doit être utilisé pour préparer l'ARN à tester avec ce kit.
Transcription inverse
Afin de suivre la procédure du test, un ADN complémentaire (ADNc) est d'abord synthétisé
à partir de l'ARN de l'échantillon à l'aide de la transcriptase inverse. C'est cet ADNc qui
sert ensuite de matrice initiale pour la PCR analytique.
7 Mode d'emploi (manuel) du therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit 08/2019