Qiagen therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit Mode D'emploi page 27

Remarque : Le tampon RT 1 et la transcriptase inverse sont des composants visqueux.
Il est donc recommandé de les pipeter délicatement.
Tableau 3. Mélange pour la réaction de transcription inverse.
Composant
Tampon RT 1*
Tampon RT 2
Mélange d'amorces RT
Transcriptase inverse
†
Volume total du mélange principal
* Inclut du Mg et des dNTP.
2+
Contient également un inhibiteur de la RNase.
†
8. Agiter au vortex les réactifs RT en effectuant 3 impulsions de 3 secondes afin de garantir
que tous les réactifs sont bien mélangés.
9. Centrifuger brièvement les réactifs RT pour récupérer les gouttelettes sur les parois et les
couvercles des tubes.
10. Stocker le mélange réactionnel RT dans le bloc de refroidissement.
11. Disposer le nombre nécessaire de tubes de PCR de 0,2 ml dans le bloc de chargement.
12. Distribuer 10 µl de mélange réactionnel RT dans chaque tube de 0,2 ml.
13. Agiter au vortex l'eau pour NTC, le diluant du contrôle positif et le contrôle positif fournis
avec le therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit, ainsi que les échantillons d'ARN normalisés, en
effectuant 3 impulsions de 3 secondes afin de garantir que tous les tubes sont bien mélangés.
14. Centrifuger brièvement l'eau pour NTC, le diluant du contrôle positif, le contrôle positif et
les échantillons d'ARN normalisés pour récupérer les gouttelettes sur les parois et les
couvercles des tubes.
15. Ajouter les échantillons à chaque tube contenant le mélange principal de transcription
inverse, conformément au Tableau 4. Pipeter directement chaque échantillon dans le mélange
réactionnel RT du tube ; pour le contrôle positif, pipeter d'abord le contrôle positif puis le
diluant du contrôle positif. Après l'addition de chaque échantillon, régler la pipette sur 15 µl,
homogénéiser 5 à 10 fois par aspiration-refoulement et fermer les tubes immédiatement.
27 Mode d'emploi (manuel) du therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit 08/2019
Volume par réaction RT
5 µl
2,5 µl
1,25 µl
1,25 µl
10 µl