Quantification Et Normalisation De L'arn - Qiagen therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit Mode D'emploi

Si vous utilisez du tampon RPE et de la DNase I exempte de RNase pour la première
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fois, veiller à les reconstituer comme décrit dans le manuel du RNeasy DSP FFPE Kit.
Amener tous les tampons à température ambiante (entre 15 et 25 °C). Mélanger le
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tampon RPE reconstitué en l'agitant.
Régler un bloc chauffant avec agitation sur 56 °C en vue de son utilisation aux étapes 5
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et 9. Pour réduire le temps d'attente, régler un deuxième bloc chauffant avec agitation
sur 80 °C pour l'utiliser à l'étape 9.
Remarque : Ne pas interrompre la procédure de purification entre les incubations, car
l'augmentation du temps d'incubation peut entraîner la perte ou la dégradation de l'ARN.
Procédure
Suivre la procédure de purification de l'ARN décrite dans le manuel du
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RNeasy DSP FFPE Kit. Dans le protocole « Purification de l'ARN total à partir des coupes
de tissus FFPE », veiller à utiliser les volumes nécessaires pour le traitement de plus de 3
à 4 coupes (volumes marqués par ).
Éluer l'ARN dans 30 µl d'eau exempte de RNase fournie avec le RNeasy DSP FFPE Kit.
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Aliquoter 3 µl d'ARN élué pour la quantification.
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Stocker les éluats d'ARN entre –90 et –65 °C.
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Quantification et normalisation de l'ARN

Procédure
Mesurer un blanc sur le spectrophotomètre avec l'eau exempte de RNase fournie avec le
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RNeasy DSP FFPE Kit qui a servi pour l'élution de l'ARN.
La quantité d'ARN est déterminée par mesure de la densité optique à 260 nm.
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Quantité totale d'ARN purifié = concentration x volume d'échantillon en µl.
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Mode d'emploi (manuel) du therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit 08/2019 24