Table des Matières
Publicité
Les mélanges réactionnels du therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit contiennent la HotStarTaq
®
DNA Polymerase, une Taq polymérase modifiée produite par QIAGEN. Elle est fournie à
l'état inactif et ne possède aucune activité enzymatique à température ambiante. La
formation de produits mal amorcés et de dimères d'amorce est ainsi évitée pendant la
préparation de la réaction et la première étape de dénaturation. Il n'y a donc pas de
consommation des réactifs de la PCR par des artéfacts, ce qui permet d'obtenir une
sélectivité élevée. L'enzyme est activée au début de la réaction par une étape d'incubation à
95 °C pendant 15 minutes. Ce démarrage à chaud permet de préparer rapidement et
facilement les réactions à température ambiante.
Les mélanges réactionnels du therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit contiennent aussi un
tampon de PCR, qui a été spécialement conçu pour effectuer la PCR multiplex en temps réel
avec des sondes spécifiques d'une séquence. Ce tampon contient un mélange optimisé de
KCl et de (NH
)
SO
, qui favorise l'obtention d'une forte proportion de liaisons d'amorces
4
2
4
spécifiques aux dépens des liaisons d'amorces non spécifiques pendant l'étape
d'hybridation de chaque cycle de PCR. Cela crée des conditions strictes d'hybridation des
amorces, qui entraînent une plus grande spécificité de la PCR. Avec ce tampon,
l'hybridation des amorces est très faiblement affectée par la concentration en MgCl
, donc
2
l'optimisation par dosage de Mg
n'est pas nécessaire. Ce tampon contient également du
2+
facteur MP synthétique, qui facilite la PCR multiplex. Le facteur MP augmente la
concentration locale en amorces et en sondes au niveau de la matrice d'ADNc et stabilise
spécifiquement les amorces et sondes liées, favorisant l'efficacité de l'hybridation et de
l'extension. La combinaison de ces différents composants dans le tampon de PCR empêche
les différentes réactions d'amplification d'interférer les unes avec les autres.
11
Mode d'emploi (manuel) du therascreen FGFR RGQ RT-PCR Kit 08/2019
Publicité
Table des Matières
