Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC Guide D'utilisation page 32

Remarque : tous les matériaux de remplissage à base de silice présentent une
certaine solubilité dans les phases mobiles aqueuses de pH > 6. En cas d'utilisation
d'une colonne à base de silice à pH > 6, vous pouvez prolonger la durée de vie de
la colonne en l'utilisant à des températures inférieures (40 °C maximum) et avec
des concentrations de tampon faibles comprises entre 0,01 et 0,02 M.
Notes concernant le développement de méthodes pour les
colonnes à phase normale
La phase stationnaire est de nature polaire et convient plus particulièrement
aux phases mobiles non polaires telles que les mélanges de chlorure de
méthylène:hexane ou isopropanol/hexane. Augmenter la quantité du composant
polaire dans ces mélanges revient typiquement à réduire le temps de rétention
de l'échantillon.
Type de colonne
ZORBAX NH2
Polaris NH2
ZORBAX Rx-SIL
ZORBAX SIL
Pursuit XRs Si
Polaris Si-A
InfinityLab Poroshell 120 EC-CN
ZORBAX Eclipse XDB-CN
ZORBAX CN
Développement de méthodes
La rétention diminue avec l'augmentation de la
polarité de la phase mobile.
De nombreux volumes de colonne de phase mobile
sont nécessaires pour assurer la stabilisation après
une modification de la composition de la phase
mobile. Le nombre de volumes de colonne requis
dépend du système utilisé et peut atteindre 50 à
100 volumes de colonne.
Les colonnes à base de silice non greffées sont
très sensibles aux traces d'eau dans les solvants et
dans l'échantillon, il convient donc de maintenir des
conditions uniformes pour assurer la reproductibilité
de la méthode. Dans le cas d'un gradient d'élution,
les solvants primaire et secondaire doivent être
modifiés par un ajout d'alcool ou d'acétonitrile, et
au moins 30 volumes de solvant doivent circuler
dans la colonne à l'issue de chaque analyse.
Lors du basculement d'un solvant à l'autre,
commencez par rincer la colonne avec un solvant
miscible dans les deux, tels que l'alcool isopropylique.
Les colonnes Agilent InfinityLab Poroshell 120
EC-CN et ZORBAX Eclipse XDB-CN sont livrées
avec des solvants à phase inverse, mais elles
peuvent également être utilisées pour des
applications en phase normale. Dans ce cas,
commencez par les rincer avec de l'isopropanol.
La rétention diminue avec l'augmentation de la
polarité de la phase mobile.
Il est souvent plus pratique d'utiliser cette colonne
plutôt qu'une colonne de silice, en particulier pour
les gradients d'élution, du fait de la stabilisation
rapide de cette phase greffée avec la phase mobile.