Table des Matières
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11.5
Analyse des données de real-time PCR
L'analyse des données de real-time PCR avant celle des
données HRM présente un avantage. Les données de real-
time PCR peuvent mettre en évidence les dosages mal
effectués. L'identification de ces aberrations et leur élimination
de l'analyse HRM suivante améliorera nettement l'efficacité
globale de l'analyse HRM, car l'analyse d'un produit de la
PCR de qualité médiocre donnera des résultats de HRM
médiocres. Nous recommandons d'analyser les données de
real-time PCR quantitative comme suit.
1. Analysez les données en temps réel à l'aide de l'option
2. Évaluez le niveau de fluorescence finale. Si la fluorescence
3. Utilisez
Manuel d'utilisation du Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM (CA) 05/2018 11-15
« Quantitation »
« Analysis » (Analyse). Si des valeurs de C
moins 30, les réactions correspondantes sont considérées
comme ayant amplifié trop tard. Ces échantillons doivent
être analysés avec méfiance ou retirés de l'analyse en tant
qu'aberrations. L'amplification tardive est généralement
due à une quantité de matrice de départ insuffisante et/ou
à des niveaux élevés de dégradation de l'échantillon.
finale sur l'un des tracés d'amplification est faible
comparée à la plupart des tracés de la série de données,
retirez ces échantillons de l'analyse même si leur valeur
de C
est inférieure à 30. Une fluorescence finale faible
T
peut indiquer une quantité incorrecte de colorants, des
niveaux incorrects de composants de la réaction (comme
les amorces) ou l'action d'inhibiteurs.
l'option
(Quantification comparative) dans la fenêtre « Analysis »
(Analyse) pour obtenir l'efficacité de la réaction de chaque
échantillon. Si l'efficacité n'est pas semblable à d'autres
réactions de l'expérience ou est inférieure à 1,4 environ,
écartez la réaction en tant qu'aberration.
Analyse de fusion haute résolution
(Quantification)
« Comparative
dans
la
fenêtre
sont d'au
T
Quantitation »
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