Qiagen Rotor-Gene Q MDx CE Manuel D'utilisation page 95

Par exemple :
Il n'est pas possible d'obtenir un intervalle de confiance de 95 % à partir d'un ensemble de
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concentrations calculées sélectionnées, car le modèle de régression doit aussi être pris en
compte.
L'écart-type « Orders of Magnitude » (Ordres de grandeur) est indiqué pour les concentrations

calculées, pas comme une valeur absolue. Il s'agit d'une variation de pourcentage. Par
exemple, une valeur
(278 974 – 322 611) = (300 000/1,07537 – 00 000 * 1,07537). Une valeur absolue n'est
pas pertinente pour une courbe étalon. La valeur peut être fournie à la concentration la plus
faible pour créer une faible erreur perçue (± 3 copies) ou à une concentration élevée
(± 3 000 000 copies). C'est pourquoi on utilise l'écart-type « Orders of Magnitude » (Ordres
de grandeur).
Pour les concentrations calculées, la moyenne géométrique est utilisée à la place de la moyenne
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arithmétique. Cela est dû à la nature exponentielle de la real-time PCR. Par exemple, en cas de
dilutions doubles avec 1, 2, 8 et 16 copies, la moyenne doit être de 4 copies, car c'est le milieu
de la série de dilutions. Mais la moyenne arithmétique est de 6,75. La moyenne géométrique
est de (1 * 2 * 8 * 16)^(1/4) = 4 copies.
Normalisation du tube dynamique
L'option Dynamic Tube (Tube dynamique) est sélectionnée par défaut, elle permet de déterminer le
bruit de fond moyen de chaque échantillon juste avant le début de l'amplification.
La normalisation standard prend simplement les 5 premiers cycles et s'en sert d'indicateur du niveau
de bruit de fond de chaque échantillon. Tous les points de données pour l'échantillon sont ensuite
divisés par cette valeur pour normaliser les données. Cela peut manquer de précision car, pour
certains échantillons, le niveau de bruit de fond au-delà des 5 premiers cycles peut ne pas être
révélateur du niveau de bruit de fond juste avant l'amplification. A contrario, la normalisation du
tube dynamique utilise la dérivée seconde de chaque trace d'échantillon pour déterminer un point
de hausse pour chaque échantillon. On calcule ensuite la moyenne du niveau de bruit de fond à
partir du cycle 1 jusqu'à ce numéro de cycle de hausse pour chaque échantillon. Cela donne des
résultats de quantification d'une grande précision.
Notez que pour certaines séries de données, la fluorescence de fond n'est pas homogène durant
les cycles qui précèdent le début de l'amplification. Dans ces cas-là, il peut être nécessaire de
désélectionner la normalisation du tube dynamique en cliquant sur Dynamic Tube (Tube
dynamique), sinon cela pourrait donner une quantification moins précise.
Manuel d'utilisation du Rotor Gene Q MDx CE 02/2022
de 1,07537 représente une variation de 7,54 %
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