Qiagen Rotor-Gene Q MDx CE Manuel D'utilisation page 61

en cours de cycle. Le niveau de fluorescence est plutôt comparé au pic de fusion, cela permet de
définir le seuil de dénaturation.
Sur le graphique suivant, les valeurs de fluorescence brute et la dérivée première ont été
superposées. Cela montre la correspondance entre le seuil de dénaturation et le pic de fusion
obtenu pendant l'étalonnage.
1,5
1,25
1
0,75
0,5
0,25
0
Pour effectuer un cycle de dénaturation optique, il vous faut :
Un produit de la PCR préamplifié à mettre dans la position 1 du rotor. Cet échantillon doit

contenir le même produit de la PCR que les échantillons d'intérêt ainsi qu'un produit de détection
pour surveiller la dissociation du produit de la PCR.
Un profil de dénaturation optique. Vous pouvez créer un nouveau profil ou modifier un profil

existant (reportez-vous aux détails ci-après).
Un cycle de dénaturation optique semble quasiment identique aux autres cycles. Les principales
différences sont le palier de fusion automatiquement ajouté au début du profil et le profil spécifique
du palier de dénaturation en cours de cycle. Le cycle de dénaturation optique ne nécessite aucune
durée de maintien dans la mesure où la dissociation du produit est surveillée à chaque cycle.
Pour utiliser cette technique, les informations suivantes sur le cycle d'exécution sont impératives :
La température de dénaturation initiale. Il s'agit de la même température qu'au palier de

dénaturation d'un profil de cycle standard.
La position du tube de l'échantillon de PCR qui donnera une courbe de fusion sur le canal vert.

Un profil de cycle de dénaturation optique doit être défini.

Créez un nouveau cycle de dénaturation optique comme suit.
Manuel d'utilisation du Rotor Gene Q MDx CE 02/2022
Pic de fusion
Seuil de
dénaturation
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