Qiagen Rotor-Gene Q MDx CE Manuel D'utilisation page 60

Fusion haute résolution
L'analyse de fusion haute résolution (High Resolution Melt, HRM) permet de caractériser les
échantillons d'ADN double brin d'après leur comportement de dissociation (fusion). Elle est similaire
à l'analyse de courbe de fusion classique, mais donne bien plus d'informations pour un plus grand
nombre d'applications. Il est possible de distinguer les échantillons selon la séquence, la longueur,
le taux de GC ou la complémentarité des brins, et jusqu'aux changements de paires de bases
individuelles.
L'analyse High Resolution Melt, HRM ne peut être effectuée que sur les instruments équipés d'un
matériel et d'un logiciel de HRM. Les données sont acquises à l'aide de sources et de détecteurs de
HRM spécifiques. L'analyse HRM offre en outre la possibilité de réaliser l'optimisation du gain juste
avant le début de la fusion. Après une HRM, les données peuvent être analysées avec un logiciel
d'analyse HRM (section 10).
Cycle de dénaturation optique
Le cycle de dénaturation optique est une technique d'excitation, disponible sur le
Rotor-Gene Q MDx, qui permet une analyse de fusion en temps réel afin de déterminer le pic de
fusion d'un échantillon de référence. Cela indique la dénaturation du produit de la PCR avec une
précision plus importante qu'en définissant une température de dénaturation particulière pendant
une durée de maintien. Pour utiliser cette technique, il suffit de mettre un tube de référence de
produit de la PCR dans la position 1 du rotor. Le tube de référence doit aussi contenir un produit
de détection capable de détecter la dissociation des brins.
Lors du chauffage à la température de dénaturation initiale, une fusion se produit sur le canal vert
de 80 à 95 ºC, par défaut. L'utilisateur peut ajuster les paramètres de cette fusion initiale. Une
courbe de fusion est générée à partir de ces données et analysée automatiquement.
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Le pic de fusion est comparé aux données brutes pour obtenir un seuil de dénaturation. Ensuite, à
chaque palier du cycle de dénaturation optique, l'instrument est chauffé aussi vite que possible et
les données sont acquises en continu.
Dès que le tube de référence atteint le niveau de fluorescence du seuil de dénaturation, l'instrument
est immédiatement refroidi et passe au palier suivant programmé du cycle. Aucun pic n'est calculé
Manuel d'utilisation du Rotor Gene Q MDx CE 02/2022
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