Table des Matières
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d)
Les échantillons de
plasma et de sérum
n'ont pas été
préparés, conservés
ou mélangés
correctement
e)
Peu ou pas d'ADN
dans l'éluat
f)
Volume d'élution
utilisé incorrect
g)
Transfert d'un
éventuel inhibiteur
40
Commentaires et suggestions
La procédure de purification est optimisée pour une utilisation avec des échantillons de
plasma et de sérum humains. Les échantillons de sang traités avec de l'EDTA ou du
citrate comme anticoagulant peuvent être utilisés pour la préparation de plasma. Après
le prélèvement et la centrifugation, le plasma ou le sérum peut être conservé entre 2 et
8 °C jusqu'à 6 heures. Pour la conservation de longue durée, la congélation sous forme
d'aliquotes entre -80 °C et -20 °C est recommandée.
Les échantillons de plasma ou de sérum congelés ne doivent pas être décongelés plus
d'une fois. Un processus de congélation/décongélation répété entraîne la dénaturation
et la précipitation des protéines, ce qui a pour résultat des titres viraux réduits et, par
conséquent, des rendements réduits d'acides nucléiques viraux.
Décongeler les échantillons sous agitation douce pour garantir un mélange correct.
Si possible, réduire le volume d'élution ou augmenter la quantité d'éluat ajoutée à la
réaction.
Déterminer le volume d'éluat maximal convenant à votre application en aval. Réduire
ou augmenter en conséquence le volume d'éluat ajouté à l'application en aval. Le
volume d'élution peut être adapté de façon proportionnelle. L'élution avec des volumes
de Buffer AVE plus faibles donne des concentrations en acides nucléiques plus élevées.
Veiller à effectuer l'étape de centrifugation de séchage avant l'élution pour éviter une
éventuelle inhibition du dosage en aval.
Il est important d'utiliser un nouveau tube d'élution pour éviter une contamination avec
les tampons de lavage résiduels susceptible d'inhiber le dosage en aval.
conformément à des études des interférences types pour le QIAamp DSP Virus Kit et à
la norme ISO 20186-2:2019(E), l'héparine provenant de tubes de prélèvement
sanguin peut avoir une incidence sur la pureté des acides nucléiques isolés et un
possible transfert dans les éluats pourrait inhiber certaines applications en aval. C'est
pourquoi nous recommandons d'utiliser des échantillons sanguins traités à l'EDTA ou
au citrate comme anticoagulant.
Mode d'emploi (Manuel) du QIAamp DSP Virus Kit 06/2022
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