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Méthode de calcul de la profondeur de pénétration de la lumière évanescente
Pendant l'illumination en fluor escence en r éflexion interne totale, l'indication de la commande de r églage de l'angle
d'incidence du laser de l'illuminateur laser permet de calculer la valeur théorique de la profondeur de pénétration de la
lumière évanescente.
1. Valeur de référence de la commande de réglage de l'angle d'incidence du laser
La valeur de référence est l'indication donnée par la position de la commande a vec laquelle la NA d'incidence au
condenseur devient 1,33 (égale à l'indice de réfraction de l'eau).
Cette position de la commande v ariant en fonction de l'installation de l'illuminateur laser , déterminer la v aleur de
référence applicable en se reportant au tableau suivant. Il montre les valeurs de référence possibles relevées par les
techniciens Olympus après installation.
Position de l'illuminateur
Valeurs de référence possibles
2. NA d'incidence du condenseur et angle d'incidence θ
Si l'on suppose que l'indication de la commande de r é glage de l'angle d'incidence du laser est X , la NA d'incidence
du condenseur et l'angle d'incidence θ
<
NA d'incidence du condenseur
Sin θ
= {(X – α) + 9,22}/5,68-0,293
NA = 1,516
·
1
Angle d'incidence θ θ θ θ θ
<
de l'échantillon
1
Sin θ
= NA/1,516
1
3. Profondeur de pénétration de la lumière évanescente
La valeur NA d'incidence calculée plus haut peut êtr e utilisée pour calculer la v aleur théorique de la pr ofondeur de
pénétration de la lumière évanescente.
}Noter que la pr o fondeur de pénétration est variable et dépend à la fois de la longueur d'onde du laser et de l'indice de
réfraction de l'échantillon.
<
Profondeur de pénétration de la lumière évanescente
Avant droit
Arrière droit
α =
α =
de l'échantillon
1
de l'échantillon peuvent être calculés grâce à la formule suivante :
1
>
>
>
d = λ/4π
(NA
– n
2
n
: Indice de réfraction du verre.
1
Lamelle de verre standard pour NA 1,45=1,516
n
: Indice de réfraction de l'échantillon.
2
Eau = 1,33
Cellule = 1,38
θ
: Angle d'incidence de l'échantillon
1
NA = n
Lorsque χ : Distance depuis le centre de l'axe de la lumière.
C : Coefficient de correction
Avant gauche
α =
)
2
2
= χ /f + C
, Sin θ
1
1
f : Distance focale du condenseur
WI-CDEVA
Arrière gauche
α =
22
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