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Filtre passe-haut (LP)
Les filtres passe-haut bloquent toute la lumière en dessous d'une
certaine longueur d'onde mais laissent passer toute la lumière avec
des grandes longueurs d'onde. Cette longueur d'onde est appelée
longueur d'onde de coupure.
(1)
Pour les échantillons marqués à l'aide d'un fluorochrome dans
lesquels la bande d'ondes fluorescente et la bande d'ondes
d'excitation (lumière que la préparation absorbe pour émettre
une lumière fluorescente) sont très proches, choisissez un filtre
d'arrêt avec la longueur d'onde de coupure la plus courte possible
pour une microscopie par fluorescence efficace et performante. Si
la longueur d'onde de coupure est longue, la lumière excitatrice et
la lumière fluorescente seront totalement distinctes, tendant à
assombrir le fond des images fluorescentes. Cependant, les
progrès récents réalisés pour obtenir des filtres performants ont
abouti à une utilisation croissante des longueurs d'ondes de
coupure courtes.
(2)
Pour des échantillons à marquage multiple, utilisez un filtre passe-
haut pour une observation au microscope d'images fluorescentes
de toutes les couleurs. Notez qu'une combinaison comportant un
miroir dichroïque ordinaire, un filtre d'excitation et un filtre d'arrêt
de type filtre passe-haut
fluorochromes qui émettent une lumière fluorescente avec une
grande longueur d'onde, par exemple le TRITC si vous utilisez du
FITC ou du TRITC. Vous obtiendrez alors des images fluorescentes
très sombres avec un marquage TRITC. Dans ces cas, nous vous
recommandons d'utiliser des filtres multibandes.
Filtre passe-bande (BP)
Les filtres passe-bandes laissent passer uniquement la lumière d'une
certaine longueur d'ondes et bloquent toutes les autres longueurs
d'ondes.
Les filtres passe-bandes sont utilisés pour observer des images
fluorescentes marquées à l'aide d'un fluorochrome spécifique dans
des échantillons à marquage multiple. (Par exemple, dans un
échantillon marqué avec du FITC et TRITC, le filtre BA520-560 permet
d'observer uniquement l'image fluorescente émise par le FITC.)
Cependant, les filtres passe-bandes n'indiquent pas l'autofluorescence
éventuelle (car l'image fluorescente dans la combinaison ci-dessus est
verte uniquement). Les filtres passe-haut sont mieux adaptés pour des
distinctions fines d'autofluorescence basée sur de légères différences
de couleurs.
sera
incapable d'exciter des
Filtre passe-haut
(Les images marquées aux FITC et TRITC sont visibles.)
Filtre passe-bande
(Seule l'image marquée au FITC est visible.)
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