Table des Matières
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QwikCheck™
Système de visualisation SQA-V : lame standard
1.
Se référer à la section « CONTROLS » du manuel d'utilisation de l'automate SQA-V qui décrit la procédure d'utilisation
du réactif QwikCheck™ beads (niveau 1 / niveau 2). Suivre les instructions relatives à l'homogénéisation du manuel
d'utilisation de l'automate SQA-V..
2.
Suivre les instructions relatives à l'homogénéisation et à la préparation des réactifs QwikCheck™ beads indiqués
précédemment
3.
Pipeter 3.5 µL of QwikCheck beads sur une chambre (lame) à couvre-objet fixe (Fixed cover-slip).
4.
Si des bulles d'air apparaissent, recommencer pour s'assurer d'un résultat correct.
5.
Insérer la lame dans la chambre de visualisation, appuyer sur le bouton « Zoom-Out » jusqu'à arrêt du moteur de
déplacement de la caméra afin de sélectionner l'objectif x 300 et fixer l'image en utilisant le logiciel V-Sperm de
l'ordinateur.
6.
Tourner la molette de déplacement des champs de vision dans le sens anti horlogique jusqu'à la butée. Compter les
billes manuellement de la même manière qu'un échantillon de semence selon les procédures définies par l'OMS : compter
2fois et jusqu'à un minimum de 200 billes (tourner le bouton de l'adaptateur de lame afin de visualiser plusieurs champs
de vue).
7.
Se référer à la table 2.4 du manuel WHO 5ème édition afin de déterminer si le comptage est acceptable.
Chambre de Neubauer (100-micron de profondeur, dilution requise):
Suivre les instructions du vendeur pour l'utilisation de la chambre de Neubauer et se référer au WHO Manual Guidelines
pour la détermination de la concentration en spermatozoïdes
(WHO Manual, Section 2.7, 5th Edition):
1.
Diluer les billes dans de l'eau distillée comme suit: Le facteur de dilution pour le contrôle haut (high-level QwikCheck
beads - Level 1) est 1:4 (1 part de billes + 3 parts d'eau) et le facteur de dilution pour le niveau bas (low level - Level 2)
est 1:2 (1 part billes + 1 part d'eau).
2.
Vortexer les deux niveaux (Level 1 and Level 2) avant d'aspirer l'aliquote afin d'assurer une distribution homogène des
billes. Le contrôle négatif ne nécessite pas d'opération de vortex.
3.
Placer le couvre-objet de la chambre de manière adéquate.
Transférer 10 μl of du contrôle dilué dans chaque zone de comptage de l'hémocytometre
4.
5.
Incuber l'hemocytometre durant 5 minutes and chambre humide (cela permet la sédimentation des billes).
6.
Compter les billes à un grossissement de x200 – x400 en utilisant cinq aires de 1/25 mm carrés
dans le large carré central comme montré dans la grille.
7.
Effectuer un comptage doubler des niveaux 1 et 2 séparément sur de nouveaux aliquotes et en
comptant 5 carrés chaque fois. Se référer à la table 2.4 du WHO Manual, 5th Edition pour
déterminer les valeurs de sommes et de différences et voir si elles son ten accord avec les
valeurs de tolérance. Sinon, recommencer l'opération depuis le début.
8.
Calculer les résultats:
LEVEL 1 (High) – Prendre la moyenne des deux valeurs de comptage obtenues pour le Level
1 (somme divisée par deux). Diviser le nombre obtenu par 5. Exemple: Le comptage de 5
carrés comme montré ci-dessus avec 2 échantillons différents (chacun dilué comme décrit, à savoir une part de billes et
trois parts d'eau) donne 240 et 220, La moyenne est 230. Divisez 230 par 5. On obtient: 230 / 5 = 46 X 10
LEVEL 2 (Low) – Prendre la moyenne des deux valeurs de comptage obtenues pour le Level 2 (somme divisée par
deux). Diviser le nombre obtenu par 10.
échantillons différents (chacun dilué comme décrit, à savoir une part de billes et une part d'eau) donne 220 et 210, La
moyenne est 215. Divisez 215 par 10. On obtient: 215/10 = 21.5 X 10
Comparer les résultats obtenus avec les valeurs cibles mentionnées sur la boite.
Chambre de Makler (10-micron de profondeur, pas de dilution):
Suivre les instructions du vendeur pour l'utilisation de la chambre de Makler et se référer au WHO Manual Guidelines pour
la détermination de la concentration en spermatozoïdes.
1.
Homogénéiser les billes par rotation du flacon dans la main (ne pas utiliser de vortex). Aucune dilution n'est requise pour
un comptage en chambre de Makler.
2.
S'assurer que les surfaces en verre sont propres et exemptes de poussière.
3.
Placer une petite goutte de QwikCheck
4.
Le placement du verre de couverture sur les 4 ergots va disperser de manière égale l'échantillon sur une profondeur de
10 micromètres sur le disque inferieur.
Sperm Quality Analyzer Guide Version 1.00
TM
beads in dans le centre du disque inférieur.
I-Button WHO 5th_1_JUN_2018
:
. Exemple: Le comptage de 5 carrés comme montré ci-dessus avec 2
6
33
/ ml.
TM
6
/ ml.
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